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影响谷氨酸脱氢酶的因素有哪些?

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影响谷氨酸脱氢酶的因素有哪些?

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谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用。为更好地研究谷氨酸脱氢酶的性质和促进该酶的应用,我们先要了解对谷氨酸脱氢酶的各项指标。

  1. 谷氨酸脱氢酶PH稳定性的测定

将一定量的谷氨酸脱氢酶稀释至PH4~12的缓冲液中,25条件下放置20H。其中,PH4~6为醋酸缓冲液,PH6~8范围为磷酸盐缓冲体系;PH8~10Tris-CL缓冲体系,PH10~12为甘氨酸缓冲体系。然后37℃条件下测定残存谷氨酸脱氢酶的活力。实验表明该种谷氨酸脱氢酶具有PH作用范围广的优点,在PH5~10范围内稳定性较好,酶残存活力在90%以上。

  1. 谷氨酸脱氢酶最适反应温度的测定

温度是影响酶作用的重要因素。酶反应的速度随温度的变化而变化。通常温度每增加10℃,酶反应速度增加1~2倍。在一定条件下,每种酶都有一个最适宜的作用温度在最适温度下酶的活力最高,作用效果最好。为了测定谷氨酸脱氢酶的活力取一定量的谷氨酸脱氢酶稀释至PH8.30.1mol/LTris-CL缓冲液中,然后在紫外分光光度计上将反应温度分别调整至3035℃、4045℃、50℃、55℃条件试剂保温1min,然后加入稀释好的谷氨酸脱氢酶测定活力。实验表明该种谷氨酸脱氢酶的最适反应温度是45℃。

  1. 谷氨酸脱氢酶最适PH的测定

酶在一定的较狭的PH值范围内表现出最高活力,这个PH值就是酶作用的最适PH值。高于或低于这一PH值,酶的稳定性下降,活性受到影响。为了测定谷氨酸脱氢酶的最适PH,配制如下种类缓冲液:PH范围为6~7.50.1M磷酸钾缓冲液PH范围为6~7.50.1M Tris-HCL缓冲液;PH范围为8.5~10.50.1M甘氨酸缓冲液。以上3种缓冲液中含有0.1mol/L的氯化铵、0.01mol/Lα一酮戊二酸和7.5mol/LNADH。取一定量的谷氨酸脱氢酶稀释至PH8.3.01mol/LTris-CL缓冲液中。然后37℃条件下测定谷氨酸脱氢酶在不同PH条件下的活力。实验结果表明谷氨酸脱氢酶最适PH值是7.5

  1. 谷氨酸脱氢酶Km值的测定

米氏常数(Km)是酶的特征性常数,Km只与酶的种类、反应体系的PH和反应温度有关系,而与酶的浓度和底物的浓度无关。酶的米氏常数越大,说明需要的底物浓度越高,所以酶的Km数值是反应酶性质优略的重要指标。

德晟研发生产的谷氨酸脱氢酶适用于诊断试剂盒内,而诊断试剂原料用酶属于酶制剂行业的一个小分支,与工业用酶不同,生化诊断试剂用原料酶理化性质要求较高。一种好的诊断试剂原料酶应当具有条件是热稳定性好、PH稳定范围宽,Km数值较低。

问题列表

Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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