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肌氨酸氧化酶的米氏常数

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肌氨酸氧化酶的米氏常数

2021/07/02 17:05
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酶制剂的相关的生化检测中,除了测量各种待测指标的含量、浓度、稳定水平之外,还有检测酶的活性的指标,像血糖、血脂、肌酐这些都是测的浓度,而转氨酶、肌氨酸氧化酶这些指标就需要测酶活了。

酶活通俗来讲就是酶催化作用的活力,这涉及到酶的一个动力学参数——米氏常数Km,其含义是酶促反应达最大速度(Vm)一半时的底物(S)的浓度。酶反应时的速度并不均匀,不像浓度一样呈线性关系,但米数常熟是一定的,它是酶的一个特征性物理量。酶的米氏常数随测定的底物种类、反应的温度、pH及离子强度而改变。在同一条件下,无论酶的的浓度是多少,在达到最大反应速度时,所需底物的浓度都是一样的。

肌氨酸氧化酶的米氏常数测定方法:

用pH8.0的Tris-HC1缓冲液配制浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mmo1/L的肌氨酸溶液,于37℃反应5min的条件下测定SOX在不同肌氨酸浓

度时的初始氧化活力。得到反应速度V和1/V。根据Lineweaver-Burk双倒数作图法,以1/[s]为横坐标,1/V为纵坐标作图,计算SOX对肌氨酸的Km和Vmax。

肌氨酸氧化酶的米氏常数结论:

米氏常数可用于判断酶的专一性,Km值越小,说明酶与底物的亲和力越大,该底物越适宜作为该酶的天然底物。根据上文肌氨酸氧化酶的测试与计算,其米氏方程为y=1232.5X+8.7012相关系数为0.9947:计算得SOX对肌氨酸的Km及Vmax值分别为141.6mmol/L和0.115mmol/(L.min)。

需注意的是来源不同的肌氨酸氧化酶SOX对肌氨酸的米氏常数具有一定的差异性,如来源于Corynebac1erium的SOX对肌氨酸的Km值为21mmol/L。由于米氏常数与酶的浓度无关与酶的种类有关,这一点也可以用于酶的鉴定或测定。德晟生化专注于生化检测领域,有包括SOX、胆固醇酯酶、葡萄糖氧化酶等在内的多种酶制剂提供。

 

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