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生物缓冲液使用中受影响的因素

2021/07/14 17:05
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在生物化学实验中,绝大多数溶液体系的反应都需要加入生物缓冲液来控制调节或维持体系的pH值变化范围,像TrisBicineCAPS等都是比较常用的缓冲液。对于特定的某种缓冲液来说,特定温度下的pKa确定,其pH缓冲范围也基本确定,不过其使用还是会受到一些因素的影响。

生物缓冲液使用中受影响的因素

缓冲液浓度和缓冲比

缓冲溶液的缓冲比决定了其维持的pH值范围,而浓度大小决定其维持特定pH值的能力,其缓冲效果并不是无限有效的。缓冲液与研究体系之间无干扰不是指完全不反应,而是只发生酸碱反应(像复分解反应这类),不发生其它反应。其浓度越高,缓冲容量越大,缓冲效果越好,缓冲溶液的浓度相对研究体系中的酸碱浓度来说必须大很多,以避免缓冲剂被过度消耗而失去缓冲能力。不过,太高的浓度也会使体系离子强度增大,影响酶或蛋白的稳定性。

缓冲液的离子强度

在有些实验中,体系的离子强度对实验时为造成影响的,尤其是在核酸和蛋白质的电泳实验中。在电泳缓冲液中,离子强度影响是很大的,体系的离子强度越大,意味着自由移动的离子越多,导电能力越强,电泳的速度越快。所以在DNA琼脂糖凝胶电泳时,除了用Tris缓冲液来保证DNA的良好溶解和所需pH范围之外,还要添加适量的氯化钠。Tris缓冲液离子强度相对较低,添加氯化钠可以增加导电率,加快电泳的速度。离子强度大的缓冲溶液,可能也有着比较高的渗透压,在细胞培养中细胞外渗透压过高可能会导致细胞脱水死亡。

通常我们会配制较高浓度的缓冲溶液,在使用时再稀释到所需的倍数;Tris缓冲液有着较低的离子强度,常用于蛋白质核酸的上样缓冲液、清洗缓冲液,而在电泳时则加入氯化钠增加其离子强度,作为电泳缓冲液。德晟是生物缓冲剂的研发及生产厂家,提供有TrisBicineHEPES等多种缓冲剂。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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