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Trinder's 反应与Trinder's试剂

2019/04/02 16:22
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导语:
  体外诊断试剂或试剂盒的原理有很多种。比如:酶联免疫法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)、酶法、胶体金法、免疫印迹法等等。
  每一种原理,可以适用于多个待测项的检测。比如以Trinder反应为原理(也叫酶法),可用于血检中尿酸,肌酐,血糖,胆固醇,甘油三酯等的检测。
  Trinder's 反应与Trinder's试剂
  Trinder's 反应:
  此反应首先由Trinder于1969年提出,故名Trinder反应。其原理为被测物质通过酶作用产生的过氧化氢(H2O2)在4-氨基替比林(4-AAP)、过氧化物酶(POD)的存在下,使色原物质可生成红色醌亚胺化合物。最初使用苯酚作生色剂,后来有许多种化合物替代苯酚,使反应的灵敏度得以显着提高。Trinder反应构成了葡萄糖、胆固醇、甘油三脂及尿酸等酶法测定的基础。
 
  Trinder's 试剂:
  在Trinder's 反应中所说的色原物质或者生色剂就是Trinder's 试剂,也叫色源底物或氢供体。
 
  Trinder's试剂的种类
  传统Trinder's试剂:
  酚类:苯酚,4-氯苯酚 or 3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠等
  苯胺类:N,N-二烷基苯胺,N,N-二烷基-间甲苯胺等
 
 
  新型Trinder's试剂:
  苯胺磺酸钠盐(十种):ADPS, TOOS, TOPS, ADOS, HDAOS, DAOS, ALPS, MAOS, MADB, TODB.
  酶,新型Trinder's试剂,Good's缓冲剂之间的关系
 
 
  1,Trinder反应涉及三个步骤:
  步骤一,将新型Trinder's试剂,4-AAP,待测项对应的氧化酶(测血糖时,用对应葡萄糖氧化酶,尿酸对应的尿酸氧化酶等)以及过氧化物酶混合 。
  步骤二,将Good's缓冲剂加到步骤一得到的混合物中。
  步骤三,将待测物(血清)加到前两步得到混合,就发生颜色反应,通过吸光度的测定,就可以算出待测项的值。比如血清中的血糖,尿酸的数值等等。
  2,为什么用酶,因为血清中含有太多物质,而酶有专一性,比如加葡萄糖氧化酶,只会催化氧化血糖生成过氧化氢,而不会催化氧化血清中同时存在的尿酸等。
  3,由于用到酶,而pH值对酶的活性影响很大。每一种酶都有各自的高活性PH值区间。比如过氧化物酶最适pH值7.0左右,萄糖氧化酶最适pH值为3.5 – 6.5,尿酸氧化酶最适合pH8.5左右等
  4,不同的Good's缓冲剂,则可以提供不同的酶所需要的各自适合的缓冲区间。
 
 

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