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生物缓冲液对蛋白的影响有哪些?

2021/07/26 13:30
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生物缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大降低pH变动幅度的溶液,弱酸及其盐的混合溶液(如HOAcNaOAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2ONH4Cl)等都是缓冲液。缓冲液在生化实验中用途广泛,在蛋白质分离纯化过程中发挥着重要的作用。

蛋白质的分离和纯化是一项复杂的任务,每一种蛋白的纯化过程都不完全相同,因此在蛋白提取和制备过程中使用适当的蛋白质纯化方法,才能获得稳定的蛋白质。在整个过程中,蛋白质的稳定取决于所使用的多组分缓冲体系,最佳条件就是既可以溶解蛋白质,又可以保持生物活性。

由于大部分的蛋白质纯化均在体外进行,所以目前市面上重组蛋白对应的缓冲系统都可能地模拟天然蛋白质在体内的条件以期达到蛋白稳定保存和运输的目的。

缓冲液的主要作用是为目标蛋白质提供最适的环境。在选择和配制缓冲液的过程中,必须考虑以下几个因素:

1.缓冲液成分:

缓冲液本身的缓冲成分不应与蛋白质发生相互作用。例如,一些酶被磷酸盐缓冲液的磷酸盐基团抑制,会导致蛋白的功能缺失。也说明每种蛋白质适合的缓冲液不完全相同,因此用户溶解蛋白时应尽量选择说明书推荐的缓冲液以最大程度保证蛋白的稳定性和相应对活性。典型的缓冲液浓度范围为20100mM,并且可能需要向离子强度敏感的蛋白质或镁等金属离子等添加其他成分(盐溶液为150mM),这对于某些酶是有活性的而言是必需的。

2.酸碱度:

pH取决于蛋白质的实际应用。如果使用蛋白质进行某种类型的生物测定,例如酶测定,应选择酶显示最佳活性的pH。当制备用于纯化技术的蛋白质(离子交换,凝胶过滤等)时, pH应根据实验条件来选择,以获得最大的纯化效率。当不需要特定的pH时,蛋白质表现出最佳稳定性的pH就是最好的,这一点对于蛋白质的储存尤其如此。

德晟专业从事采血管添加剂,体外诊断试剂,生物缓冲剂,发光底物的研发、生产、销售。可提供多种缓冲液原料(TRISHEPESMOPS),还可根据客户需求配置不同浓度的缓冲液。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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