吖啶酯化学发光反应条件优化

吖啶酯化学发光试剂在碱性条件下，可以被过氧化氢氧化，产生化学发光现象，反应非常灵敏，反应迅速、发光强度大，由于是自身发光，不需要像荧光那样用光源照射，消除了背景干扰，它逐步成为主流的检测方法。本文介绍其化学发光反应条件的优化方法。

吖啶酯化学发光实验条件

介质与pH值对吖啶酯发光的影响

为吖啶酯提供碱性条件的介质很多，比如在碳酸钠、碳酸钠-碳酸氢钠、磷酸二氢钠-磷酸氢钠、磷酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾等介质中吖啶酯都能与过氧化氢发生反应，产生较强的化学发光。吖啶酯在氢氧化钠介质中发光强度比其它介质中更大。实验中，外加0.05mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液时，吖啶酯发光强度达到峰值；外加0.01~0.15mol/L氢氧化钠溶液时，发光强度变化较小。

吖啶酯溶液浓度及用量

吖啶酯溶液浓度为30-100μmol/L时，其发光信号差异比较小，添加的体积为50、100、150微升时，发光强度变化较小，取中位数100μL 浓度为50μmol/L的吖啶酯溶液较好。

添加组分的选择

测定化学发光强度时，通常采用静态注射法，先将几种反应组分混合均匀，然后在添加或注射最后一种组分，促使产生化学发光反应。分别将氢氧化钠、过氧化氢和吖啶酯作为注射试液，结果表明注射添加吖啶酯溶液时，发光强度更大。

酶反应液稳定性

有时氧化吖啶酯的过氧化氢由酶反应生成，经试验，酶反应完成后，溶液室温放置1小时内，过氧化氢浓度基本不变，因此吖啶酯发光强度几乎无变化；但放置1.5小时后，发光强度明显降低。

除上述几点外，反应体系中加入一定量的无极离子或有机物，吖啶酯检测结果会有影响，需要控制杂质离子的含量。德晟在化学发光试剂的研发合成上具有独特优势，可提供多种类型的吖啶酯试剂。