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缓冲剂pH与离子强度对蛋白纯化的影响

2021/08/05 13:30
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蛋白纯化指利用离子交换层析将不同的蛋白分离,使目标蛋白纯化的过程,其中缓冲剂的pH值与离子强度除了保护蛋白结构稳定外,还直接影响离子交换剂对蛋白的吸附作用,对蛋白纯化过程作用关键。

缓冲剂pH与离子强度对蛋白纯化影响

缓冲剂pH与离子强度

蛋白纯化是一个蛋白分离提纯的过程,首先需要保证蛋白结构的完整,保证蛋白活性,就需要通过缓冲剂维持蛋白适应的pH值,同时调节合适的离子强度(比如常用的Tris缓冲剂添加NaCl增加盐浓度),过高的盐浓度影响蛋白的溶解甚至使蛋白沉淀。除此之外,缓冲剂pH值与离子强度对蛋白与离子交换剂的吸附作用也有重要影响。

缓冲剂pH值对蛋白吸附的影响

在离子交换层析中交换剂有两种类型:阳离子交换剂和阴离子交换剂。阳离子交换剂本身结合有阴离子基团,能置换出阳离子,能吸附带正电荷的蛋白与其交换,阴离子交换剂则相反。而缓冲剂pH与蛋白等电点相等时,蛋白静电荷为0不被吸附,缓冲剂pH值高于等电点,蛋白游离羧基带负电荷,从而可以被阴离子交换剂吸附;缓冲剂pH低于等电点,蛋白游离氨基带正电,能进行阳离子交换层析。

缓冲剂离子强度对蛋白吸附影响

不同蛋白所带电荷不同,与交换剂结合程度不同,除改变缓冲剂pH值外,还可改变离子强度,来影响蛋白与交换剂的吸附,从而把不同蛋白逐个分离。蛋白的胶体离子与无机盐离子都可被交换剂吸附,有竞争性。比如Tris-NaCl缓冲剂中,离子浓度增大,蛋白就不容易吸附或吸附后容易洗脱,离子强度小,蛋白就容易吸附不易洗脱。

综上所述,缓冲剂的pH与离子强度除了维持蛋白结构稳定外,还能调节蛋白胶粒电荷性以及蛋白于是离子交换剂的吸附作用。德晟是生物缓冲剂厂家,可提供蛋白纯化所需的缓冲剂TrisMOPS等。

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