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离子交换层析缓冲液的使用

2021/08/10 17:05
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离子交换层析技术是以离子交换纤维素或离子交换葡聚糖凝胶为固定相,以蛋白质或其它样品为移动相,以分离和提纯蛋白的技术。移动箱样品除蛋白外还可以是核酸、酶、激素、多糖等等,这些物质大多对pH敏感,需配制的合适的缓冲液来维持体系pH

离子交换层析缓冲剂Tris

蛋白质与缓冲液pH的关系

蛋白质纯化是离子交换层析中比较典型的,以此来举例作说明。蛋白质由多种氨基酸脱水缩合形成,具有两性,同时有酸性的羧基和碱性的氨基。当蛋白质的等电点与缓冲液pH值相等时,静电荷为0;当缓冲液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质羧基游离,蛋白质带负电荷;当缓冲液pH低于蛋白质等电点时,则氨基电离,蛋白带正电荷。缓冲液pH值与蛋白等电点相差越大,蛋白携带电荷越多,反之则越少。血清蛋白均带负电荷,但是各种蛋白所带的负电荷程度有差异,其中白蛋白最多,其次是球蛋白。

缓冲液与离子交换剂的关系

离子交换层析中的离子交换剂分为阴离子型和阳离子型,分别可吸附带负电蛋白质和带正电蛋白质。缓冲剂中的离子或体系其它离子与蛋白质的胶体离子类似,都具有交换吸附的能力。为了减少干扰,尽量选择离子类型与离子交换剂相反的缓冲液。比如阴离子交换层析采用阳离子型的Tris缓冲剂;阳离子交换层析用阴离子型的HIPES等缓冲剂。

缓冲液对离子吸附影响

缓冲液pH升高时,抑制蛋白质的阳离子化,其对阳离子交换机的吸附作用减弱;pH降低时,抑制蛋白质阴离子化,降低了其它,随之降低了其对阴离子交换剂的吸附。当使用阴离子交换剂时,增加盐离子,则降低pH值。

缓冲液除了pH影响层析,其它离子也会与蛋白质产生竞争性的交换吸附,增加离子强度也能达到分离蛋白的目的。德晟是生物缓冲剂生产厂家,可提供TrisBicineMOPS等多种缓冲剂满足不同离子层析的需求。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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