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一种提取肝素钠的方法

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一种提取肝素钠的方法

2021/08/16 13:30
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肝素钠是一种粘多糖硫酸酯类抗凝剂,它是从猪或牛的肠粘膜中提取的CSSO3的钠盐,属于粘多糖物质。是目前世界上zui有效临床用量zui大的抗凝剂。本文主要介绍一种提取肝素钠的工艺,以猪肠黏膜为原料,通过生物酶解技术,提取肝素钠的方法。

肝素钠

 肝素钠的提取工艺,其步骤如下:

  1. 酶解:以猪的小肠粘膜为原料投入搅拌器中,加入原料重量0.5%的牛淀粉酶(3.5万U/g),混匀后调至pH 8.0-9.0,加温至45-50℃后恒温搅拌酶解2.8小时,需控制酶解过程中反应体系的pH值稳定。
  2. 酶灭:所得酶解液升温至90℃,保持10min灭酶,然后立即冷却。

3、过滤:急冷液用过滤器过滤两次,先用孔径为2微米的滤膜粗滤,再用孔径为0.22微米的膜过滤,去除杂质后得到滤液。

4、酶解蛋白物质:滤液调至pH 7.5-9.0,然后升温至45-55℃,加入原料重量0.5%的风味蛋白酶(3.8万U/g),45-55℃搅拌酶解4-6小时,控制反应体系的pH值稳定是用酶解液升温至90℃,在酶解灭活的过程中保持10分钟后立即冷却得到淬火液。

5、去除蛋白:用滤膜孔径5微米的过滤器去除蛋白,浓缩淬火液。

6、沉积:在液体浓缩器中,加入95wt%乙醇等密度,搅拌后沉淀10小时然后除去上清液,在沉积中加入无水乙醇脱水后冻干得肝素钠粗品。

7、精制:将加入9倍肝素钠粗品重量的纯水调pH至1.5然后溶解粗品,过滤除杂,所得滤液再调pH至11,记下此时溶液的体积,再按该体积的4%加入30wt%双氧水,25℃保持氧化,注意控制反应体系的pH稳定在11。氧化30小时后,调pH至6.5,此时加入溶液等密度的95wt%乙醇搅拌后静置10小时,除去上清液,沉淀中加入等密度无水乙醇脱水,滤出乙醇沉淀物经通风、蒸发、沉淀去残留乙醇,真空干燥后得到肝素钠精制。

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