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吖啶酯化学发光效率的检测

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吖啶酯化学发光效率的检测

2021/09/07 13:30
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我们知道化学发光免疫分析是体外诊断领域一种比较先进的检测方法,而吖啶酯是化学发光试剂中检测灵敏度高、量子产率高的试剂,而且其发光反应不需要酶的催化,那么吖啶酯的发光效率究竟怎么检测呢?

吖啶酯化学发光效率检测:

用光度计测量吖啶酯受激发后每秒的光量子数,并分别测量不同浓度体积的发光强度,即可得到其发光效率。

  1. 首先准备化学发光实验所需的试剂,包括有:二甲基甲酰胺DMF,纯度>99%;过氧化氢、硝酸、氢氧化钠分析纯;十六烷基三甲基氯化铵(Ctac)Tween-20TritonX-10096微孔板;抗人TSH单克隆抗体
  2. 取一定量的DMAE-NHS溶液于微孔板中,96微孔板用黑色不透光的微孔板,加入发光启动试剂,在发光仪上测量发光计数随时间的变化。测量NSP-DMAE-NHS或其它类型的吖啶酯也是用类似的方法。
  3. 通过改变发光启动试剂中各成分(H2O2HNO3NaOH)的浓度和体积,分别测量对应不同浓度体积的发光强度,可以分析出发光启动试剂及表面活性剂对DMAE-NHS发光强度的影响。在发光启动试剂中分别加入表面活性剂CtacTween-20TritonX-100,测量发光强度。

吖啶酯化学发光中各试剂实验

吖啶酯发光实验中,过氧化氢为激发化学发光的氧化剂,氢氧化钠使体系pH值处于碱性环境,激发剂中加入盐酸或硝酸具有一定的促进作用;另外加入表面活性剂CtacTween-20TritonX-100也可以增强化学发光,不过Ctac会引起本底的增加,不宜作为吖啶酯DMAE-NHS化学发光的增强剂。

吖啶酯的化学发光效率很高,不过它与鲁米诺的化学发光有很大区别,鲁米诺是辉光型,发光持续时间久,吖啶酯是闪光型,发光时间只有2-4秒,需用光度计即时检测。德晟研发的吖啶酯除DMAE-NHS之外,还有5种,可用于不同种类蛋白、抗体、核酸的标记。

 

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