化学发光试剂吖啶酯的溶解与标记

吖啶酯是化学发光免疫分析中所使用的一类化学发光试剂，这种分析技术常用于的检测项目有性激素、甲状腺激素、骨代谢、肿瘤标志物、免疫球蛋白等等，所以吖啶酯的相关研究和使用时非常热门的。

相比于电化学发光，目前国内以吖啶酯作为化学发光试剂的应用更加普遍，不需要非常昂贵的设备。吖啶酯化学发光检测主要具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定性好且有效期长、检测线性范围宽、操作简单、方法稳定快速、检测项目多、自动化程度高等优点，逐步成为目前免疫分析技术的主流方法。

吖啶酯发光标记

吖啶酯的溶解方法

吖啶酯通常是以冻干粉的形式低温避光保存的，在使用时第一步就是将其配成溶液。吖啶酯在检测过程中通常是直接标记蛋白、抗体或核酸的，检测环境一般为水溶液，所以一些吖啶酯都会增加一些抗水解与亲水性的基团。那么是不是就是用水来溶解吖啶酯呢？

答案是否定的，吖啶酯的溶解与标记过程中依然要求是严格无水的，应该用非质子化的溶剂DMF（N,N-二甲基甲酰胺）或DMSO（二甲基亚砜）等来溶解。在标记之前，吖啶酯主体末端的羧酸与NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）相连从而活化，非常活泼，所以只能用非质子化的溶剂来溶解。吖啶酯用DMF较高溶解的浓度为4mM (约2.7mg/mL)，在DMSO中溶解度约为10mg/mL。

吖啶酯的标记基团

吖啶酯上通常使用NHS标记基团，可以直接与蛋白上的一级氨基相连接，同时脱去N-羟基琥珀酰亚胺。吖啶酯标记完成后，与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在，就可以稳定存在于弱酸性缓冲中了，含有抗水解性基团与亲水基团的还可以稳定于中性水溶液。吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定，偶联后用弱酸性的缓冲液，鼓氮气除去氧气。

吖啶酯有多种类型，德晟研发销售的有6种，有四种通过NHS酯标记，一种吖啶羧酸通过CDCI缩合剂来与蛋白相连，还有一种吖啶酰肼通过连接基团中的游离氨基来耦联含醛基的多糖与核酸。