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色原底物TOOS保持稳定的方法

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色原底物TOOS保持稳定的方法

2021/10/09 13:30
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色原底物TOOS试剂,化学名称为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐,或者3-N-乙基-甲苯胺基)-2-羟基-丙磺酸钠,是酶光度法测定生化试剂盒中核心的显色试剂。显色反应直接影响检测的灵敏度,所以底物和酶的稳定性非常重要。

色原底物TOOS的保存

TOOS能产生显色反应的前提是,它在储存中不能被提前氧化,否则可能会造成检测结果的偏低。以德晟的TOOS试剂为例,成品都是做成固体粉末的形态,低温保存在密封且不透光的棕色瓶子中,这样TOOS粉末不会因长期保存而被空气缓慢氧化,也不会因为温度过高或者光照之后变质。

色原底物TOOS粉末

TOOS用于干化学法与湿化学法

色原底物TOOS的蕞大摩尔吸光度很高,所以显色的灵敏度也非常高,除了用于湿化学法(溶液)中之外,还能用于干化学法。可以将将TOOS试剂、耦联的4-AAP及所需酶(HRP等)固定在膜载体上,滴加样品后生成H2O2继而释放出新生态氧,氧化显色底物,通过反应产物的量来间接地测定目标成分。需注意的是,不论是TOOS还是酶,在干化学法中受温度、压力、光照影响稳定性差,湿化学法中酶处于液态或低浓度也易失活。

色原底物TOOS提高稳定性:

  1. 可以添加显色底物TOOS的保护剂,如具有碳原子数816的烷基的表面活性剂及类黄酮系色素物质,但配方复杂且对测试有干扰。通过使用多种酶如ALTASTLDHALPCK在水溶液或血清基质中,酶的稳定性提高,干化学试纸作用不显著。
  2. 添加比显色底物TOOS还原性更强的保护剂,但其加入的保护剂含有伯氨基常常引起非特异性反应。有的通过添加具有还原作用的柠檬酸钠,对TOOS的抗氧化有一定作用。

通过添加保护剂来提高色原底物TOOS以及酶的稳定性的方法比较多,不过并不算完美解决问题。根据德晟的经验,这一类试剂尽量是使用时临时配制,尽量不配制成溶液储存。

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