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吖啶酯(NSP-SA-NHS)的注意项及标记蛋白计算方法

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吖啶酯(NSP-SA-NHS)的注意项及标记蛋白计算方法

2022/01/07 13:30
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吖啶酯(NSP-SA-NHSCas199293-83-9及其相关化合物已被证明是非常有优势的化学发光标记物,其稳定性、活性和敏感性超过了某些放射性同位素。吖啶酯能与含有一级氨基的蛋白发生反应。在碱性条件下,NHS作为离去基团被取代,蛋白质与吖啶酯形成稳定的酰胺键。反应完成后,多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。蛋白质,多肽,抗体,核酸都可以用吖啶酯进行标记。吖啶酯在碱性过氧化氢的激发下快速发光,因此通过收集光子可以检测到标记化合物。主要用于:化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究。

注意事项

1. 吖啶酯除了DMF,也可以用无水DMSO等非质子性溶剂来溶解。

2. 标记前,由于吖啶酯末端羧基经NHS活化较为活泼,请用非质子性的干燥无水溶剂来溶解;标记后,标记后吖啶酯与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在,酸性溶剂基本没有影响;吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定,因此应根据被标记物的稳定性配制相应的非强碱性非氧化的体系中处理和保存。

3. 发光标记物在光照条件下有可能部分分解,以致影响发光效果。吖啶酯的实验操作和储存建议避光条件下处理

4. 吖啶酯标记蛋白等大分子化合物建议用G25脱盐柱分离;吖啶酯标记小分子化合物建议用柱层析分离

5. 吖啶酯发光过程是十分短暂(整个过程的发生小于2秒),触发方案必须增加内部光度计和光子探测器;另外,本产品也可以使用配备自动进样器的多功能酶标仪进行发光数据采集,大限度降低加样时间对采集信号的影响。

标记蛋白效率计算方法

1. 100uL 待测样品,稀释至Abs2800.1~1.5之间;

2. 1中加入少量盐酸,调整至pH=1~2,使其形成具有黄色特征的盐溶液,吸收峰在367nm

3. 分别测试待测样品的Abs280nm Abs367nm

4. Equation1: 吖啶酯浓度(mol/L)=Abs367/14650

5. 校正蛋白Abs280数值

Equation2: Abs280(校正后) = Abs280- (Abs367×0.17);

6. 准备1mg/ml 未标记的蛋白溶液(e.g. 50ug 蛋白加入50µL 标记缓冲液),取出10µL 并补加490µL ddH2O (稀释50)。读取Abs280nm ,并乘以稀释倍数。

7. 计算蛋白质量浓度(mg/ml

8. 计算F/P摩尔比

储存&运输条件

 储存条件:﹣20℃,充氮气,避光

  运输条件:2-8℃,避光

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