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交换色谱常用的缓冲剂有哪些?

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交换色谱常用的缓冲剂有哪些?

2022/07/09 13:30
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在离子交换过程中保持pH的恒定是十分重要的,pH的改变会造成蛋白质带电荷数量和分布状况发生变化,从而直接影响到蛋白质是否能结合在交换剂上以及结合力的强弱。因此,在离子交换色谱中流动相必须使用缓冲液。

生物缓冲液的种类很多,能够起缓冲作用的物质可分为两类:第一类是由弱酸(或弱碱)及相应的盐构成的系统;第二类是兼性离子化合物。对于第一类缓冲物质,在进行离子交换时,如果缓冲离子所带的电荷与离子交换剂上的功能基团相反,将参与离子交换过程,并可能对局部pH产生影响,因此应尽可能采用与功能基团带同种电荷的缓冲离子,即:使用阴离子交换剂时选择带正电荷的缓冲离子;使用阳离子交换剂时选择带负电荷的缓冲离子。

阳离子交换色谱常用的缓冲液

当然这也并不是绝对的,比如磷酸盐缓冲液也经常在阴离子交换过程中被采用,但在这种情况下应特别注意在上样前充分平衡,确保色谱系统的pH和离子强度与起始缓冲液一致。第二类缓冲物质在阴、阳离子交换中均能采用。表1和表2分别列出了阳离子交换色谱和阴离子交换色谱时常用的缓冲液。

阴离子交换色谱常用的缓冲液

离子交换色谱的流动相必需是有一定离子强度的并对pH 有一定缓冲能力的溶液。为了避免目的蛋白失活,使用缓冲液可稳定流动相的pH,使之在色谱过程中不发生明显变化,同时可稳定目的分子上的电荷量,保证色谱结果的重要性。

选择缓冲液一般按照以下原则:阳离子交换剂应选用阴离子缓冲液,可用柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、甘氨酸盐等;阴离子交换剂应选用阳离子缓冲液,可用烷基胺、Tris、氨基乙醇胺、乙二胺、咪唑等;起始缓冲液的浓度应尽可能低(<100mmol/L)这样可以使色谱柱上更多的吸附分离物质;

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