显色底物DA64及DA67的应用原理及使用示例

发布时间:

2022-11-20


一、DA64-DA67的应用原理

过氧化氢是用于生物体中痕量组分分析、环境物质等检测的中间体。DA-64和DA-67经过过氧化物酶的配合后具有高灵敏度可以检测出过氧化氢,是一种水溶性显色试剂。相对于传统显色试剂,DA-64和DA-67水溶性和高灵敏度都有优势,不必在为了提高灵敏度选择发光、荧光试剂。用比色计就可以获得结果,不仅简单而且快捷。DA-67的优点是比DA-64更抗共存物质的影响,特别适用于生物体成分样本的检测。

二、DA64-DA67的使用说明

1.制备显色溶液  

① 把4.08 mg DA67和1 mL100 units/mL的过氧化物酶(POD)放到配置的的PIPES缓冲剂中溶解,定容溶液至100 mL(DA67 100 μmol/L溶液);

② 将上述制备的溶液3 mL与10 μL样本溶液(H2O2:0~5 mmol/L)混合,37°C条件下培育5分钟;

③ 用分光光度计检测666 nm处的吸光度,以空白(用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液)的吸光度差作为检测值,用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。

2.制备检测POD活性的显色溶液

① 把4.08 mg DA67和1 mL H2O2(2%)加到配置好的Mcllvaine缓冲液中溶解(PH值5.7),定容至100 mL;

② 将上述制备的溶液2 mL与2 mL样本溶液(1 fmol~1 pmol/tube POD)在37°C下孵育;

③ 用分光光度计检测666 nm处的吸光度,以减去空白的吸光度差作为检测值,用另外制作的校准曲线即可确定样本中的含量数值。

DA-64,DA-67