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化学发光免疫分析系统分类介绍

2019/06/14 15:25
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么是化学发光?

化学发光:在常温下由化学反应产生的光,产生电子能级处于激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子,从而导至的发光现象。化学发光是一个多步骤的过程。

化学发光按照发光时间可以分为:

闪光(Flash): 发光时间在数秒内,如吖啶酯,以原位进样(In Situ Injector) 和时间积分法测量。

辉光(Glow): 发光时间在数十分钟以上,如:HRP-Luminol系统、AP-AMPPD系统、黄嘌呤氧化酶系统,无须原位进样,以速率法测量。

什么是化学发光免疫分析?

化学发光免疫分析(CLIA) 诞生于1977年,是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析,将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来建立的微量测定技术,因此该技术灵敏度高、线性范围宽、应用范围广。而且CLIA与放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比,操作简便、反应快速、无放射污染,仪器简单稳定且可以实现自动化。

化学发光免疫系统分类

根据免疫系统的固相载体进行分类,可将化学发光分为:

板式化学发光免疫分析系统,固相载体为微孔板,需要反应时间较长,代表厂家科美、新波等;

管式化学发光免疫分析系统,固相载体为微粒子,比较主流的微粒子是微米级别的超顺磁微粒。大多数管式化学发光为大型免疫分析系统,代表厂家罗氏、雅培、西门子、贝克曼等。国内已有厂家将管式化学发光应用于POCT。

根据免疫反应状态进行分类,可将化学发光分为:

均相化学发光免疫分析系统:均相条件下反应和检测,无需分离系统。比如科美光激化学发光系统和西门子德灵系统;

非均相化学发光免疫分析系统:主流的化学发光系统,发光检测前,需要将未反应结合的样品洗脱分离。

根据发光体系的不同进行分类,可将化学发光分为:

化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析、电化学发光免疫分析法、光激化学发光免疫分析。

化学发光免疫分析(直接化学发光)

化学发光免疫分析(CLIA),用化学发光试剂直接标记抗体或者抗原的一类免疫检测方法。

鲁米诺类标记的化学发光免疫分析:鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中,鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光,其中H2O2最为常用。

吖啶酯类标记的化学发光免疫分析:吖啶酯在H2O2和OH-条件下,能迅速发光,吖啶酯衍生物标记效率高且稳定性好,因此吖啶酯作为标记物用于免疫分析,发光体系简单、成本低,具有较低本底且能快速检测。

化学发光酶免疫分析(酶促化学发光)

化学发光酶免疫分析(CLEIA)属酶免疫分析,只是酶反应的底物是发光剂。反应步骤:以酶标记生物活性物质进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP )和碱性磷酸酶(ALP)。

HRP-H2O2-LUMINOL体系:使用过氧化物酶标记抗体,进行免疫反应后,利用鲁米诺作为发光底物,在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH和H2O2)作用下鲁米诺发光,同时加入增强剂,以增强发光信号。

ALP-AMPPD发光体系:AMPPD在碱性条件下本底很低,热稳定性好且检测结果稳定。ALP-AMPPD发光体系具有很较高的灵敏度,已得到广泛应用。

电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析(ECL)是指由电化学反应引起的化学发光过程。ECL的反应在电极表面进行,发光底物为三联吡啶钌[Ru(byp)2+3 ],以三丙胺(TPA)来激发光反应,它包括电化学和化学发光两个过程。ECL的突出优点:标记物非常稳定;发光时间长、灵敏度高、线性范围宽、反应时间短。

光激化学发光免疫分析

光激化学发光( LiCA)是以纳米级高分子微粒为基础的新一代化学发光技术。 试剂由含有感光化合物的感光微粒和含有发光化合物的发光微粒组成。LiCA技术的核心原理是高能态离子氧的产生和传递,是由光激发产生的均相化学发光技术。它具有低本底、快速、均相(免洗脱)、高灵敏度等优点,但是由于是均相反应,适用于两步法反应的项目在解决假阳性率和消除HOOK效应方面具有较高研发难度。

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