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色原ADPS试剂的应用原理

2019/06/24 14:00
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色原ADPS试剂是指N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐二水合物,高水溶性,是一种新型Trinder’s试剂,生化检测中用于过氧化氢H2O2偶联的指示系统。首先我们来了解下过氧化氢偶联的指示系统。这个系统用的非常广泛,通常用到的有GOD(葡萄糖氧化酶)和POD(过氧化物酶)以及色原:传统色原苯酚,新型Trinder’s试剂(如ADPS试剂、MAOS、TOOS等),DA46,DA67等。

H2O2在过氧化物酶的作用下,可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素,导致某一波长吸光度的增加,因此可用来测定物质的浓度或活性。用于此指示系统的单一色素原有TMB、ABTS等;成对色素原有酚和4AA、MBTH和DMA等。

应用此系统的临床项目有:TC(血清总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)、Glu(血糖)、Cr(肌酐)、UA(尿酸)等

Glu(血糖)的检测为例,Glu与氧气、水在GOD催化下生成葡萄糖酸和双氧水H2O2,H2O2在POD的作用下与4AA(4-氨基安替吡啉)和酚生成醌亚胺,导致500nm处吸光度增加,增加的程度与Glu成正比,用分光广度法测吸光度的增加量即可测量血糖含量。

这里的酚现在主要用新型Trinder’s试剂代替,如ADPS,TOOS,MAOS,MADB等。新型Trinder's试剂是高水溶性苯胺衍生物,被广泛用于诊断检测和生化试验。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂有若干优势。新型Trinder's试剂足够稳定,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。

比如新型Trinder's试剂ADPS在过氧化氢和POD的存在下能与4-氨基安替比林 (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反应过,形成非常稳定的紫色或蓝色染料(与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高1.5-2倍;然而,4-AA溶液比MBTH溶液更稳定)。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢,该过氧化氢的浓度对应于底物浓度,从而通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。

葡萄糖、酒精、酰基-辅酶A和胆固醇等可以用作检测与新型Trinder's试剂及4-AA偶合的那些底物。现有10种新型Trinder's试剂(TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB, MAOS、TODB),对于特定的底物,不同种类的新型Trinder's试剂对开发最佳的检测系统是必需的。    

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