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色原底物新型Trinder's试剂和ELISA试剂盒中的TMB的区别

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色原底物新型Trinder's试剂和ELISA试剂盒中的TMB的区别

2019/07/02 17:37
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我们都知道,现在使用Trinders显色试剂和ELISA试剂盒中的TMBZ作为色原都非常普遍。那么它们有什么区别呢?

首先色原新型Trinders试剂跟传统的Trinders 试剂有类似的地方,以N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐ADPS为例,在有或氧化氢和POD存在下与4-AA(4-氨基安替吡啉)反应,苯胺的N变成C=N双键,对位上与4-AA的氨基结合成C=N双键,从而构成一种醌亚胺结构,跟对苯醌的C=O双键类似,吸收波长都在可见光区域,从而产生显色反应。所以这里的反应必须引入4-AA(或者MBTH)参与。

 ELISA试剂盒联酶免疫吸附测定的原理是:用特异性抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的特异性抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素化的特异性抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物TMB(TMBZ),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中抗原的浓度。它无需像色原ADPS、TOOS、MAOS等这些,需要引入另一种化合物(如4-AA,MBTH)来做颜色反应,但TMBZ需要在酸性条件(HCl)下作颜色反应,限制了它的应用。

不管是运用新型Trinders试剂的酶法(酶光度法)还是以TMB(TMBZ)为色原的ELISA试剂盒,其原理都是类似的。主要还是看不同类型的检测用不同的试剂盒,对于同一待测物也有不同的检测方法。

德晟科技自05年就开始研发生产血液检测体外诊断方面试剂,对色原底物新型Trinder's试剂有着较深的研究。

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