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常用的化学发光免疫分析法有哪些

2019/07/03 10:18
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化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析仪器。化学发光免疫分析仪包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光底物。
化学发光
 
1、直接化学发光免疫分析法
用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridinium ester (AE),是有效的发光标记物,其通过起动发光试剂(NaOH -H2O2 ) 作用而发光,强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析,其化学反应简单、快速、无须催化剂;检测小分子抗原采用竞争法,大分子抗原则采用夹心法,非特异性结合少,本底低;与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。
 化学发光
2、化学发光酶免疫分析法
从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA ),应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同:以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP),它们有各自的发光底物。
 
1)辣根过氧化物酶标记的化学发光酶免分析仪法
该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体(或抗原),与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应之后,形成固相宝贝抗体—待测抗原—酶(HRP)标记抗体复合物,再加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂产生化学发光。
 
2)碱性磷酸酶标记的化学发光酶免分析仪法
碱性磷酸酶标记的化学发光酶免分析系统以碱性磷酸酶标记抗体(或抗原),与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应之后,形成固相宝贝抗体—待测抗原—酶(碱性磷酸酶)标记抗体复合物,再加入AMPPD发光剂,碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
 
3、电化学发光免疫分析法
电化学发光免疫分析是以电化学发光发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体,在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应,它包括电化学和化学发光两个过程。
化学发光 
在电化学发光免疫分析系统中,磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原),用三联吡啶钌标记抗体(抗原),在反应体系内待测标本与相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成磁性微粒包被抗体—待测抗原—三联吡啶钌标记抗体复合物,这时将上述复合物吸入流动室,同时引入TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时,被安装在点击下面的电磁铁吸引住,而未结合的抗体和标本被缓冲液冲走,与此同时电极加压,启动电化学发光反应,使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移,产生电化学发光。

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