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辣根过氧化物酶的色原底物

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辣根过氧化物酶的色原底物

2019/07/09 17:31
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在生化试剂盒方面用到的色原底物常常是新型Trinders试剂(TOOSADPSMAOS等),比如肝功能、肾功能、血糖血脂系列试剂盒。但另一方面,ELISA试剂盒里虽然也用到过氧化物酶,但其辣根过氧化物酶的色原底物目前并不是Trinders试剂,在原理上是一致的。

辣根过氧化物酶的色原底物 HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)22’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[22’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)ABTS](杂环吖嗪)、四甲基联苯胺(TMB)4—氨基安替吡啉:苯酚耦联底物对等。上述色原底物受HRP作用主要有两种形式的反应:氧化还原底物的氧化作用,如OPDABTS等;一个氨基芳香剂与另一个芳香基化合物的氧化耦联,如4—氨基安替吡啉:苯酚等。

 氧化还原色原底物 OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一,其在HRP的作用下,由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成22’—二氨基偶氮苯(DAB)OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。由于OPD的不稳定性,现在的商品试剂盒中,OPD均以片剂或粉剂供应,临用时再溶解于相应的缓冲液。  

TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数,如果HRP量少,过氧化氢溶液和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min,但随后本底显色就不断加深,国内有人认为使用1SDS作为终止剂,可使鲜蓝色24h内保持不变,阴阳性对比十分明显,但在我们实验室发现1SDS对上述显色有较强的褪色作用,目前仍以硫酸作为终止剂较为理想。TMB虽然溶解度相对较低,但由于其高检测敏感性及无致突变作用,现已基本上取代了OPD而成为HRP最为常的色原底物。

ABTS在目前国内的ELISA试剂盒中基本上没有应用,但在国外ELISA试剂盒偶见有应用。

德晟科技自05年就开始研发生产血液检测体外诊断方面试剂,对色原底物新型Trinder's试剂有着较深的研究。

 

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