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诊断试剂中化学发光底物吖啶酯的标记原理

2019/07/18 17:36
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化学发光免疫检测中,我们需要用吖啶酯先标记上抗体蛋白,才能在免疫反应后对待测物进行检测,因此如何标记抗体就非常的关键了。

吖啶盐和相关化合物已被广泛证明为非常有用的化学发光标记物,其稳定性、标记特异性和检测灵敏度都超越放射性同位素。

吖啶-NHS酯即吖啶琥珀酰亚胺酯(本试剂盒所提供)能与蛋白质的一级氨基发生反应。在碱性条件下,NHS 作为离去基团被取代,蛋白质与吖啶酯形成稳定的酰胺键。反应完成后,多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在碱性过氧化氢存在下,吖啶标记的蛋白不需要酶催化就可自行发光。因此,激发液的加入 导致反应体系立即释放约 430 nm 的光子,通过使用标准光度计(luminometer)计数光子数量就可检测蛋白质的浓度。因为此发光过程是十分短暂(整个过程在 2 秒钟内完成),样品必须直接放在光度计内部光 子探测器前面。蛋白质、多肽、抗体、核酸都可以用吖啶酯标记。

这里需要注意的是,溶解吖啶琥珀酰亚胺酯时,使用的 DMF 必须严格无水,防止吖啶酯水解.不使用时,干燥密封-20℃保存。

德晟科技针对传统吖啶酯,在其结构上进行了修饰,增大了位阻,增强了抗水解性。,如在室温下,在 pH 为 7.0 的 PB 缓冲液中很稳定。

如果是不含-NHS的吖啶羧酸需要加入缩合剂 EDCI 等,才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。

为吖啶酰肼,含有游离氨基,吖啶酰肼末端适用直接偶联含有醛基的多糖,核酸或者蛋白质等。

德晟科技自05年就开始研发生产血液检测体外诊断方面试剂,对色原底物新型Trinder's试剂、生物缓冲剂及化学发光试剂有着较深的研究。

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1.从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质
从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质。

2. 从手感上,卡波姆940应是比较轻、比较松散的,由于其分子是高度聚合的长链,分子间比较松散,如果产品粉末相对紧实,则说明丙烯酸聚合反应控制不佳,聚合度不均匀或者分子大小不一等等;这样产品应用时耐剪切性、凝胶透明度、增稠性就相对差一些。

3. 从气味上,由于卡波姆本身是聚丙烯酸或聚羧基乙烯,含有酸性基团羧基,聚合物也不易挥发,有微弱的酸性气味;如果味道较重或者有其它气味,则可能是生产干燥过程中溶剂有残留。

4. 从凝胶透明度上,用水或乙醇溶解后,形成的凝胶应该透明清亮,而且凝胶均匀,如果凝胶浑浊透光性差则会严重影响使用。
1.卡波姆980与940相比,聚合物的分子更大,在不同浓度、温度、pH值等条件下,各自的粘度变化和流变性变化表现也不一样,各自耐离子性和耐剪切性也有差异。
2. 卡波姆980在应力的动态震荡下表现出了弹性,940则差一些但更易于涂抹均匀。

3.当离子存在或浓度增加时,980与940透明度影响都很小,但980耐离子性比940更高,所以能离子增加时980能提供相对更高的粘度及屈服值。
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