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诊断试剂中化学发光底物吖啶酯的标记原理

2019/07/18 17:36
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化学发光免疫检测中,我们需要用吖啶酯先标记上抗体蛋白,才能在免疫反应后对待测物进行检测,因此如何标记抗体就非常的关键了。

吖啶盐和相关化合物已被广泛证明为非常有用的化学发光标记物,其稳定性、标记特异性和检测灵敏度都超越放射性同位素。

吖啶-NHS酯即吖啶琥珀酰亚胺酯(本试剂盒所提供)能与蛋白质的一级氨基发生反应。在碱性条件下,NHS 作为离去基团被取代,蛋白质与吖啶酯形成稳定的酰胺键。反应完成后,多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在碱性过氧化氢存在下,吖啶标记的蛋白不需要酶催化就可自行发光。因此,激发液的加入 导致反应体系立即释放约 430 nm 的光子,通过使用标准光度计(luminometer)计数光子数量就可检测蛋白质的浓度。因为此发光过程是十分短暂(整个过程在 2 秒钟内完成),样品必须直接放在光度计内部光 子探测器前面。蛋白质、多肽、抗体、核酸都可以用吖啶酯标记。

这里需要注意的是,溶解吖啶琥珀酰亚胺酯时,使用的 DMF 必须严格无水,防止吖啶酯水解.不使用时,干燥密封-20℃保存。

德晟科技针对传统吖啶酯,在其结构上进行了修饰,增大了位阻,增强了抗水解性。,如在室温下,在 pH 为 7.0 的 PB 缓冲液中很稳定。

如果是不含-NHS的吖啶羧酸需要加入缩合剂 EDCI 等,才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。

为吖啶酰肼,含有游离氨基,吖啶酰肼末端适用直接偶联含有醛基的多糖,核酸或者蛋白质等。

德晟科技自05年就开始研发生产血液检测体外诊断方面试剂,对色原底物新型Trinder's试剂、生物缓冲剂及化学发光试剂有着较深的研究。

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