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基因组DNA提取方法

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基因组DNA提取方法

2019/08/06 17:30
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在德晟生产的生物缓冲剂里,像CAPS、EPPS等有很多都应用在核酸DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。那么核酸DNA提取技术具体是怎样的呢?

首先核酸可以分为携带物种所有遗传信息的DNA和负责遗传信息翻译和表达的RNA单链分子。DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离酸易溶于水;在酸性溶液中,易水解,在中性或碱性溶剂中较稳定。

天然状态的DNA 是以脱氧核糖核核蛋白(DNP)形式存在与细胞核中。要提取DNA,抽提出DNP,再去除P,再去除糖、RNA及无机离子等,从中分离出DNA。DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度影响不一样,DNP在低浓度氯化钠溶液中溶解度低浓度增加溶解度也增加,而RBP溶解度受盐浓度影响小,在低浓度氯化钠溶液中溶解度较大。因此,常用次方法分离这两种核蛋白。

除了常用的浓盐法还有阴离子去污剂法:SDS是一种阴离子去垢剂,在55~65℃条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸。

苯酚氯仿抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用,用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA的联结键已断,蛋白分子表面又含许多极性基团与苯酚相似相溶,DNA分子溶于水相。离心分层后取出水层,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。从而提取出天然状态的DNA,且纯度稳定,但不如浓盐法可以大规模抽提DNA。

水抽提法:将组织细胞破碎,用低盐除去RNA,然后将沉淀溶于水,充分溶解后离心取上层清液,加氯化钠调节,在加无水乙醇搅拌搅出DNA,并用乙醇洗涤,最后干燥。此法蛋白质含量较高,一般不用。

德晟科技自05年就开始研发生产血液检测体外诊断方面试剂,对色原底物新型Trinder's试剂、生物缓冲剂及化学发光试剂有着较深的研究。

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1.从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质
从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质。

2. 从手感上,卡波姆940应是比较轻、比较松散的,由于其分子是高度聚合的长链,分子间比较松散,如果产品粉末相对紧实,则说明丙烯酸聚合反应控制不佳,聚合度不均匀或者分子大小不一等等;这样产品应用时耐剪切性、凝胶透明度、增稠性就相对差一些。

3. 从气味上,由于卡波姆本身是聚丙烯酸或聚羧基乙烯,含有酸性基团羧基,聚合物也不易挥发,有微弱的酸性气味;如果味道较重或者有其它气味,则可能是生产干燥过程中溶剂有残留。

4. 从凝胶透明度上,用水或乙醇溶解后,形成的凝胶应该透明清亮,而且凝胶均匀,如果凝胶浑浊透光性差则会严重影响使用。
1.卡波姆980与940相比,聚合物的分子更大,在不同浓度、温度、pH值等条件下,各自的粘度变化和流变性变化表现也不一样,各自耐离子性和耐剪切性也有差异。
2. 卡波姆980在应力的动态震荡下表现出了弹性,940则差一些但更易于涂抹均匀。

3.当离子存在或浓度增加时,980与940透明度影响都很小,但980耐离子性比940更高,所以能离子增加时980能提供相对更高的粘度及屈服值。
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