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肝素的分离提取与纯化

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肝素的分离提取与纯化

2019/09/05 16:55
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在我们的采血管添加剂中有一种非常重要的抗凝剂,它就是肝素,由动物结缔组织的肥大细胞产生,多与蛋白质结合成复合体存在,这种复合体无抗凝血活性,随蛋白质的去除而活性增。肝素是世界上迄今为止已知的分子结构最复杂的化合物,短期内无法人工化学合成。

肝素为白色或灰白色粉末,无臭无味,有吸湿性,钠盐易溶于水,不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。它是一种由葡萄糖胺,L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。制剂分子量在1200~40000,抗血栓与抗凝血活性与分子量大小有关。

肝素在水溶液中带有很高的负电荷,先用盐解法或酶解法将其与杂蛋白分离出来,然后采用离子交换树脂来进行提取纯化,常用的是强碱阴离子树脂或强碱低交联度阴离子树脂。在离子交换过程中,水中的阳离子与阳离子交换树脂上的氢离子进行交换;水中的阴离子如Cl-、HCO3-、肝素等与阴离子交换树脂上的氢氧根交换。从而达到脱盐的目的。

将制得的肝素钠粗品用15倍的1%NaCl溶解,用6Mol/L的盐酸调节pH至1.5左右,过滤收集清液,调节pH加入过氧化氢,25度维持pH在11放置48小时。过滤后,调节pH用等量的乙醇沉淀,次日用虹吸出去上层清液,沉淀用丙酮洗涤脱水,在干燥即可得肝素钠精品。肝素钠再经过离子交换柱的离子交换,又可制得肝素锂或其它盐。

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOS、MAOS等新型Trinder's试剂、Bicine、Tris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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Tris学名叫三羟甲基氨基甲烷,而Tris-Cl就是Tris-HCl,只是在写法上有所不同。Tris-HCl就是在Tris-base的溶液中加入适当量的盐酸,调至所需要的PH值。Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多,有超过磷酸盐缓冲液的趋势,如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液,而很少再用磷酸盐
自肝素被发现以来,由于其起效迅速、疗效确切、抗凝作用能被逆转,至今仍被广泛地用于预防及治疗各种血栓栓塞性疾病。然而,肝素类药物种类繁多,名称相似,如肝素,低分子肝素、依诺肝素、那曲肝素等,易导致相互混淆,到底肝素类药物是什么药,分哪几类,各类肝素有何不同
肝素钠作为一种抗凝剂,在医药领域的应用量是很大的,肝素钠是由肝素与钠离子反应生成的盐。肝素广泛分布于哺乳动物的肝、肺、心、脾、肾、胸腺、肠粘膜、肌肉和血液里,因此肝素可从猪肠粘膜、牛肺、猪肺等部位提取。肝素在组织内和其他粘多糖一起与蛋白质结合成复合物,故肝素的制备过程包括原料的处理,肝素蛋白质复合物的酶解提取,离子交换吸附和分离纯化几个步骤。不管是生产厂家和使用者,我们都很关注肝素钠的价格,影响肝素钠价格的因素众多。

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