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以鲁米诺为基础的增强型化学发光底物ECL试剂

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以鲁米诺为基础的增强型化学发光底物ECL试剂

2019/09/10 17:30
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鲁米诺Luminol是一种传统的发光底物,以此为基础的ECL化学发光检测试剂是新一代增强型化学发光底物试剂,可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)催化发生化学反应而发出荧光结果可以通过X光片压片和其他显影技术展现或使用Luminometer检测

ECL超敏发光液衰减较慢15min内荧光几无减弱,检测时产生的非特异背景非常低,也可节省抗体和待测样品的用量,该试剂可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)的Westernblot免疫印迹等印迹发光显色。

ECL发光液可用于直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP关联的蛋白或核酸底物,具有极高灵敏度和高信噪比,可检测10-100 fg抗原(#P1010);其发光迅速,荧光可使X光胶片感光长达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许使用更高的抗体稀释倍数,(1:2000-1:10000),极其节省抗体。

ECL 发光液使用时有几点需注意:

1. ECL发光也使用时前面步骤可在日光下进行,但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

2.长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

3.发光工作液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

4.由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败!

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOS、MAOS等新型Trinder's试剂、Bicine、Tris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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问题列表

1.从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质
从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质。

2. 从手感上,卡波姆940应是比较轻、比较松散的,由于其分子是高度聚合的长链,分子间比较松散,如果产品粉末相对紧实,则说明丙烯酸聚合反应控制不佳,聚合度不均匀或者分子大小不一等等;这样产品应用时耐剪切性、凝胶透明度、增稠性就相对差一些。

3. 从气味上,由于卡波姆本身是聚丙烯酸或聚羧基乙烯,含有酸性基团羧基,聚合物也不易挥发,有微弱的酸性气味;如果味道较重或者有其它气味,则可能是生产干燥过程中溶剂有残留。

4. 从凝胶透明度上,用水或乙醇溶解后,形成的凝胶应该透明清亮,而且凝胶均匀,如果凝胶浑浊透光性差则会严重影响使用。
1.卡波姆980与940相比,聚合物的分子更大,在不同浓度、温度、pH值等条件下,各自的粘度变化和流变性变化表现也不一样,各自耐离子性和耐剪切性也有差异。
2. 卡波姆980在应力的动态震荡下表现出了弹性,940则差一些但更易于涂抹均匀。

3.当离子存在或浓度增加时,980与940透明度影响都很小,但980耐离子性比940更高,所以能离子增加时980能提供相对更高的粘度及屈服值。
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