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发光剂鲁米诺在蛋白质印迹法中的应用

2019/09/20 17:30
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蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot中,使用的ECL发光液就是由鲁米诺制作而成的。一般是Western Blot的最后一步,加入11的溶液A和溶液B,覆盖pvdf膜,可以显色来观察实验结果。一般使用的发光液AB分别是鲁米诺和过氧化氢

蛋白免疫印迹是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

Western BlotSouthern BlotDNA印迹杂交)Northern BlotRNA印迹杂交)杂交方法类似WB法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物或印迹的对象是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

当然WB实验的显色方法除了用鲁米诺+过氧化氢的ECLHRP发光以外,还可以用其他显色方法,比如放射自显影、第五荧光ECF和底物DAB显色。此实验中的匀浆缓冲液通常用我们Tris-HCL配成的TBS缓冲液,转膜缓冲液也是用TrisSDS、甘氨酸、甲醇缓冲体系。

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOSMAOS等新型Trinder's试剂、BicineTris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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