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在不同实验中HEPES缓冲液的配制

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在不同实验中HEPES缓冲液的配制

2019/10/15 17:00
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HEPES即4-羟乙基哌嗪乙磺酸,是一种常用的生物缓冲剂,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒、PCR诊断试剂盒中。其具有很多优点,对细胞无毒性作用,是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。pH值缓冲范围:6.8-8.2。使用终浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

根据实验的不同,HEPES buffer缓冲液的配制方法也有差异。通常有HEPES配合氢氧化钠NaOH,HEPES+盐。配制HEPES的Stock solution 时,先讲HEPES 称重溶于蒸馏水,然后用0.5-1M的NaOH调节pH,需注意有效的pH缓冲范围是6.8-8.2,然后蒸馏水定容,4℃保存。

配制HEPES缓冲盐溶液时,则需加入氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、葡聚糖等,同样用NaOH来调节pH,最后定容低温保存。在细胞-细胞黏附实验中常用的溶液Leagene HEPES缓冲液,主要由HEPES、氯化钠、氯化钾、磷酸盐、葡萄糖等组成,并含Ca2+、Mg2+离子,pH7.4,经过滤除菌处理。常用于长期聚集培养过程中清洗组织或细胞(尤其是胚胎细胞),以便保护细胞的钙黏素,同时不影响细胞聚集的形成。不含钙镁离子的HEPES-BSA溶液,简称为HA溶液,属于细胞培养液的成分之一,含部分其他盐离子,经过滤除菌处理,多适用于组织细胞原代培养中的清洗、培养。

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