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在不同实验中HEPES缓冲液的配制

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在不同实验中HEPES缓冲液的配制

2019/10/15 17:00
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HEPES即4-羟乙基哌嗪乙磺酸,是一种常用的生物缓冲剂,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒、PCR诊断试剂盒中。其具有很多优点,对细胞无毒性作用,是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。pH值缓冲范围:6.8-8.2。使用终浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

根据实验的不同,HEPES buffer缓冲液的配制方法也有差异。通常有HEPES配合氢氧化钠NaOH,HEPES+盐。配制HEPES的Stock solution 时,先讲HEPES 称重溶于蒸馏水,然后用0.5-1M的NaOH调节pH,需注意有效的pH缓冲范围是6.8-8.2,然后蒸馏水定容,4℃保存。

配制HEPES缓冲盐溶液时,则需加入氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、葡聚糖等,同样用NaOH来调节pH,最后定容低温保存。在细胞-细胞黏附实验中常用的溶液Leagene HEPES缓冲液,主要由HEPES、氯化钠、氯化钾、磷酸盐、葡萄糖等组成,并含Ca2+、Mg2+离子,pH7.4,经过滤除菌处理。常用于长期聚集培养过程中清洗组织或细胞(尤其是胚胎细胞),以便保护细胞的钙黏素,同时不影响细胞聚集的形成。不含钙镁离子的HEPES-BSA溶液,简称为HA溶液,属于细胞培养液的成分之一,含部分其他盐离子,经过滤除菌处理,多适用于组织细胞原代培养中的清洗、培养。

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOS、MAOS等新型Trinder's试剂、Bicine、Tris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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1.从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质
从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质。

2. 从手感上,卡波姆940应是比较轻、比较松散的,由于其分子是高度聚合的长链,分子间比较松散,如果产品粉末相对紧实,则说明丙烯酸聚合反应控制不佳,聚合度不均匀或者分子大小不一等等;这样产品应用时耐剪切性、凝胶透明度、增稠性就相对差一些。

3. 从气味上,由于卡波姆本身是聚丙烯酸或聚羧基乙烯,含有酸性基团羧基,聚合物也不易挥发,有微弱的酸性气味;如果味道较重或者有其它气味,则可能是生产干燥过程中溶剂有残留。

4. 从凝胶透明度上,用水或乙醇溶解后,形成的凝胶应该透明清亮,而且凝胶均匀,如果凝胶浑浊透光性差则会严重影响使用。
1.卡波姆980与940相比,聚合物的分子更大,在不同浓度、温度、pH值等条件下,各自的粘度变化和流变性变化表现也不一样,各自耐离子性和耐剪切性也有差异。
2. 卡波姆980在应力的动态震荡下表现出了弹性,940则差一些但更易于涂抹均匀。

3.当离子存在或浓度增加时,980与940透明度影响都很小,但980耐离子性比940更高,所以能离子增加时980能提供相对更高的粘度及屈服值。
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