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Bicine、EPPS等生物缓冲液的配制方法

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Bicine、EPPS等生物缓冲液的配制方法

2019/11/13 17:00
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在生化实验或检测中,几乎所有的反应都需要控制在一定的pH范围,尤其是有酶参与的反应,pH的改变对反应的影响就更大,因此用生物缓冲剂来维持反应环境的pH值。在生化实验中,很多都是模拟生物体内的检测反应,这个对pH的要求也是很高的,生物体内是通过体液调节,实验中就需要用到生物缓冲剂了。

生物缓冲剂的种类很多,配制方法也有些许差异,不过大体上的原理都是类似的,通常是在共轭酸中加入氢氧化钠或者在共轭碱中加入盐酸,两种方法都可组成有足够浓度的共轭酸碱对的缓冲溶液。这里介绍配制少量(约1-2L)双羟乙基甘氨酸Bicine或羟乙基哌嗪丙磺酸EPPS的配制方法:

Bicine缓冲液 的配制方法

(1)配0.1M溶液(A): Bicine 16.317g/去离子水 1,000ml

(2)配0.1M NaOH溶液(B):NaOH 4g/去离子水 1,000ml

(3)pH 5.1  1,000ml(A)+0ml(B)       (A):(B)=5:0

    pH 7.8   1,000ml(A)+200ml(B)   (A):(B)=5:1

    pH 8.2   1,000ml(A)+400ml(B)   (A):(B)=5:2

    pH 8.6   1,000ml(A)+600ml(B)   (A):(B)=5:3

    pH 10.4 1,000ml(A)+800ml(B)   (A):(B)=5:4

EPPS缓冲液的配制方法

(1)配0.1M溶液(A): EPPS 25.233g/去离子水 1,000ml

(2)配0.1M NaOH溶液(B):NaOH 4g/去离子水 1,000ml

(3)pH 5.2  1,000ml(A)+0ml(B)      (A):(B)=5:0

    pH 7.3  1,000ml(A)+200ml(B)   (A):(B)=5:1

    pH 7.8  1,000ml(A)+400ml(B)   (A):(B)=5:2

    pH 8.2  1,000ml(A)+600ml(B)   (A):(B)=5:3

    pH 8.8  1,000ml(A)+800ml(B)   (A):(B)=5:4

需要注意的是:配制温度控制在20度,如果需要比较准确的pH值,可以用pH计测量,然后微调A溶液和B溶液的比例,调整至特定的pH值;如果检测环境需要排除钠离子,用氢氧化钾代替氢氧化钠也是可以的,按对应的分子量改变称量的质量即可。

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOSMAOS等新型Trinder's试剂、BicineTris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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1.从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质
从外观上,优质的卡波姆应为白色松散粉末,或稍带有淡黄色,如果颜色较深,则说明产品不够纯净含有色杂质。

2. 从手感上,卡波姆940应是比较轻、比较松散的,由于其分子是高度聚合的长链,分子间比较松散,如果产品粉末相对紧实,则说明丙烯酸聚合反应控制不佳,聚合度不均匀或者分子大小不一等等;这样产品应用时耐剪切性、凝胶透明度、增稠性就相对差一些。

3. 从气味上,由于卡波姆本身是聚丙烯酸或聚羧基乙烯,含有酸性基团羧基,聚合物也不易挥发,有微弱的酸性气味;如果味道较重或者有其它气味,则可能是生产干燥过程中溶剂有残留。

4. 从凝胶透明度上,用水或乙醇溶解后,形成的凝胶应该透明清亮,而且凝胶均匀,如果凝胶浑浊透光性差则会严重影响使用。
1.卡波姆980与940相比,聚合物的分子更大,在不同浓度、温度、pH值等条件下,各自的粘度变化和流变性变化表现也不一样,各自耐离子性和耐剪切性也有差异。
2. 卡波姆980在应力的动态震荡下表现出了弹性,940则差一些但更易于涂抹均匀。

3.当离子存在或浓度增加时,980与940透明度影响都很小,但980耐离子性比940更高,所以能离子增加时980能提供相对更高的粘度及屈服值。
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