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Bicine、EPPS等生物缓冲液的配制方法

2019/11/13 17:00
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在生化实验或检测中,几乎所有的反应都需要控制在一定的pH范围,尤其是有酶参与的反应,pH的改变对反应的影响就更大,因此用生物缓冲剂来维持反应环境的pH值。在生化实验中,很多都是模拟生物体内的检测反应,这个对pH的要求也是很高的,生物体内是通过体液调节,实验中就需要用到生物缓冲剂了。

生物缓冲剂的种类很多,配制方法也有些许差异,不过大体上的原理都是类似的,通常是在共轭酸中加入氢氧化钠或者在共轭碱中加入盐酸,两种方法都可组成有足够浓度的共轭酸碱对的缓冲溶液。这里介绍配制少量(约1-2L)双羟乙基甘氨酸Bicine或羟乙基哌嗪丙磺酸EPPS的配制方法:

Bicine缓冲液 的配制方法

(1)配0.1M溶液(A): Bicine 16.317g/去离子水 1,000ml

(2)配0.1M NaOH溶液(B):NaOH 4g/去离子水 1,000ml

(3)pH 5.1  1,000ml(A)+0ml(B)       (A):(B)=5:0

    pH 7.8   1,000ml(A)+200ml(B)   (A):(B)=5:1

    pH 8.2   1,000ml(A)+400ml(B)   (A):(B)=5:2

    pH 8.6   1,000ml(A)+600ml(B)   (A):(B)=5:3

    pH 10.4 1,000ml(A)+800ml(B)   (A):(B)=5:4

EPPS缓冲液的配制方法

(1)配0.1M溶液(A): EPPS 25.233g/去离子水 1,000ml

(2)配0.1M NaOH溶液(B):NaOH 4g/去离子水 1,000ml

(3)pH 5.2  1,000ml(A)+0ml(B)      (A):(B)=5:0

    pH 7.3  1,000ml(A)+200ml(B)   (A):(B)=5:1

    pH 7.8  1,000ml(A)+400ml(B)   (A):(B)=5:2

    pH 8.2  1,000ml(A)+600ml(B)   (A):(B)=5:3

    pH 8.8  1,000ml(A)+800ml(B)   (A):(B)=5:4

需要注意的是:配制温度控制在20度,如果需要比较准确的pH值,可以用pH计测量,然后微调A溶液和B溶液的比例,调整至特定的pH值;如果检测环境需要排除钠离子,用氢氧化钾代替氢氧化钠也是可以的,按对应的分子量改变称量的质量即可。

德晟科技自05年就开始研发生产分离胶、肝素、EDTA钾盐等采血管添加剂,以及体外诊断方面试剂,对色原底物TOOSMAOS等新型Trinder's试剂、BicineTris等生物缓冲剂及鲁米诺、吖啶酯等化学发光试剂有着较深的研究,在自主研发及合成方面具有专业优势。

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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