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联酶免疫和磁珠化学发光中亲和素作用

2020/02/28 17:05
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在我们的联酶免疫吸附测定和链霉亲和素磁珠化学发光实验中,都使用到了亲和素和生物素,可见亲和素和生物素的作用是非常关键的,这里将介绍其性质和具体作用。

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—SystemBAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统,几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。例如:在联酶免疫吸附检测中,用生物素化的特异性抗体与辣根过氧化物酶标记的亲和素结合、与包被抗体上的抗原结合形成免疫复合物;化学发光免疫检测中链霉亲和素磁珠与生物素化的抗体结合;ABC法或LAB法也是亲和素分别连接生物素标记的第二抗体或生物素标记的酶。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。

生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取,有两个环,咪唑酮环是与亲和素结合的主要部位,噻吩环C2上戊酸侧链末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的唯一结构,经化学修饰后,成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素,在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联,包括蛋白质,核酸,多糖,脂类等。

亲和素(avidin,AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白,耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用与生物素结合后稳定性较好,是目前已知强度较高的非共价作用,亲和常数比抗原与抗体间的亲和力至少高1万倍,结合稳定性好专一性强,不受试剂浓度,PH环境,抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。每个亲和素能结合4个分子的生物素,可以用于构建一个多层次信号放大系统。链霉亲和素(streptavidinSA)是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质,4条相同肽链不带任何糖基,也能结合4个生物素分子,适用范围更广泛。

德晟科技致力于研究化学发光试剂,磁珠项目已经提上2020年日程上,希望在未来时间我们能够共同进步!

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