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吖啶酯发光效率影响因素有哪些

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吖啶酯发光效率影响因素有哪些

2020/03/03 17:05
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吖啶盐和相关化合物已被广泛证明为非常有用的化学发光标记物,其稳定性、标记特异性和检测灵敏度都超越放射性同位素。反应完成后,多余的吖啶盐通过脱盐柱去掉。在碱性过氧化氢存在下,吖啶标记的蛋白不需要酶催化就可自行发光。

鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物是最早使用的一类化学发光物质,但其应用于化学发光免疫分析(CLIA),需要使用催化剂,这将导致背景发光较强,使测量本底升高,从而限制了这一技术的灵敏度和它的应用及发展。吖啶酯的发光效率高,且发光体系简单,不需要加入催化剂,本底低,标记简单。由于AE-NHS的热稳定性不是很好,此后人们又相继研究合成了较AE-NHS更稳定的吖啶酯衍生物并应用于CLIA。DMAE-NHS被证明具有良好的热稳定性和发光性能。

吖啶酯DMAE-NHS的发光为闪光型,在0.4s时发光强度较大,发光半衰期约为0.9s。DMAE-NHS的发光强度为6.11*1018cps/mol,发光启动试剂的组成及表面活性剂对其发光强度有影响。DMAE-NHS的热稳定性随pH值变大和温度升高而降低。

准备试剂:抗人TSH单克隆抗体;二甲基甲酰胺DMF,纯度>99%;过氧化氢、硝酸、氢氧化钠分析纯;十六烷基三甲基氯化铵(Ctac);Tween-20,TritonX-100;96微孔板。

方法:

1. 取一定量的DMAE-NHS水溶液于微孔板中,加入发光启动试剂,在发光仪上测量发光计数随时间的变化。

2. 取100μL2.5*10-4mol/LDMAE-NHS的DMF浓溶液用蒸馏水稀释成浓度为2.5*10-7mol/L-2.5*10-13mol/L的稀溶液,各浓度点分别取50μL于微孔板中,加入发光启动试剂,在发光仪上测量每秒钟的发光光子计数(cps).

3. 发光启动试剂及表面活性剂对DMAE-NHS发光强度的影响改变发光启动试剂中各成分(H2O2、HNO3和NaOH)的浓度和体积,分别测量对应不同浓度体积的发光强度。在发光启动试剂中分别加入表面活性剂Ctac、Tween-20、TritonX-100,测量发光强度。

4. DMAE-NHS的热稳定性,将其用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PB)配成pH分别为5.8/7.0/8.0的三种不同酸度的水溶液,分别间隔一定时间后,取样置于室温和37℃保存,至16天时分别取样测量DMAE-NHS的发光强度,与4℃保存样品对比。

发光启动试剂:H2O2和NAOH;H2O2和NAOH+HNO3或HCl;上述3种加入一种表面活性剂如Ctac、Tween-20、TritonX-100等以提高发光强度。可一次加入,或者是分两次加入,先加100μL0.1%H2O2和0.1mol/LHNO3,再加入100μL0.25mol/LNaOH。加入2%Tween-20、2%TritonX-100能增加发光强度,而不引起本底增加,但加入0.2%Ctac本底会增加很多,故不宜作加强剂。

德晟科技一直致力于研究化学发光试剂,包含鲁米诺、异鲁米诺和吖啶酯系列都有强大的团队研发生产,厂家直销质量有保证!

 

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