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电泳缓冲液TAE和TBE的作用

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电泳缓冲液TAE和TBE的作用

2020/02/24 17:05
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电泳缓冲液的作用

缓冲液电泳时的作用是维持合适的PH值,电泳正极和负极都会发生电解反应,电流通过水(H2O)时,在正极发生氧化反应,生成氧气以及氢离子;在负极发生还原反应,生成氢气以及氢氧根离子。长时间电泳将会使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应该有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本稳定。

电泳缓冲液的另一个作用是使溶液带有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移。 DNA为碱性物质,在电泳(缓冲液pH=8)时带负电荷,由负极向正极迁移。

两种常用的电泳缓冲液TAE和TBE

TAE是使用较为广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种(TBE和TPE)缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得较好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换

TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果较好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。

所以我们在做DNA电泳时用哪种缓冲液体系其实取决于实验目的,总结来说,TAE的特点是缓冲容量小,但是溶解度大,易于储存。TBE的特点是缓冲容量大,但是溶解度小,不易长期储存,易产生沉淀。

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