怎样选择合适的生物缓冲剂

为实验选择合适的生物缓冲剂可能是一项艰巨的任务。可用的选项很多（Hepes，Mops，Tris，Bis-Tris等），很容易造成混淆。

了解了这些挑战后，德晟准备了一份简短的清单，以供您在选择缓冲盐进行研究时参考：

1.缓冲范围

每种缓冲试剂都有一个缓冲能力较强的pH值范围。这种缓冲能力通常由缓冲试剂的pKa决定。您必须选择pKa值接近所需范围中间值的缓冲液（通常，建议使用pKa值至少在目标pH的一个pH单位内的缓冲液）。

图片：各缓冲剂适用的PH范围

2.实验过程中的pH值变化

提前考虑在实验过程中pH值可能会升高还是降低对于选择缓冲剂至关重要。如果您认为实验中pH值会增加，则必须选择pKa稍高于实验开始时的较佳值的缓冲液。相反的情况也一样：如果您觉得pH值会降低，则选择pKa较低的缓冲液。

3.缓冲液浓度

必须调整缓冲液的浓度，以具有对实验系统足够的缓冲能力。总得来说，如果缓冲液的浓度太低，将无法稳定溶液的pH值。相反，如果浓度太高，则缓冲液很可能会影响实验。通常，建议使用高于25 mM的浓度。

对于交换氢质子不活跃的系统，通常建议浓度为25-100mM。对于可能发生质子交换的系统，建议使用比被交换质子的摩尔浓度高20倍的缓冲剂浓度。在制备缓冲溶液时，切记将溶液浓度调至预定使用浓度。

4.温度变化

您必须根据将要进行实验的温度来设置缓冲溶液的pH。温度直接影响缓冲液的pKa，从而影响系统的pH和缓冲能力。在生物系统中这种情况可能非常关键，在生物系统中，需要准确的氢离子浓度才能使反应系统以较高效率运行。

某些缓冲液（例如PIPES）的pKa对温度变化不太敏感，但是，其他选项（如TRIS，ACES，TAPS，TES或Tricine）受这些变化的影响更大。

下图显示了根据德晟生物缓冲液温度的近似pKa变化：

德晟生物缓冲液温度的近似pKa变化

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