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生物缓冲剂HEPES在不同实验中的区别

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生物缓冲剂HEPES在不同实验中的区别

2020/05/26 13:30
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HEPES,4-羟乙基哌嗪乙磺酸,是一种氢离子两性缓冲剂,缓冲能力较好,维持pH恒定时间较长,被广泛的用于核酸反应缓冲液、杂交缓冲液,以及细胞培养液。根据其特性,在不同实验中,缓冲液的配置有有一些区别。

HEPES理化特性:

2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid

CAS号:7365-45-9

分子式:C8H18N2O4S

分子量:238.3

缓冲范围:6.8-8.2

HEPES母液(储备缓冲液):直接配置0.5-1M的生物缓冲液HEPES和NaOH溶液,控制两者混合比例调节pH,然后用蒸馏水或超纯水定容即可,必要情况NaOH可用KOH代替。

HEPES缓冲盐溶液:在HEPES溶液中加入少量氯化钠、磷酸氢二钠,再加入NaOH水溶液,调节pH后加入蒸馏水定容,低温保存。

HEPES细胞培养液:在HEPES水溶液中加入少量加入氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、葡聚糖等,再用NaOH溶液调节pH,然后定容低温保存。细胞黏附实验中通常还要往HEPES培养液中加入钙、镁离子,以便保护细胞的钙黏素,同时不影响细胞聚集的形成。

HA溶液:即HEPES-BSA细胞培养液,属于细胞培养液的成分之一,不含钙、镁离子,含部分其他盐离子,经过滤除菌处理后多适用于组织细胞原代培养中的清洗、培养。

以上是德晟研发生产的HEPES缓冲剂在不同实验中的应用差异,此外公司新研发的病毒保存液非灭活型中也含有HEPES缓冲液,因其对细胞没有毒性作用,在维持pH的同时增加了病毒宿主细胞采样后体外存活时间,更大程度保留病毒核酸及蛋白的完整性,提高检验准确率。

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病毒保存液接触皮肤是否会造成影响取决于保存液中的成分。灭活型病毒保存液中主要是高浓度的裂解盐(如盐酸胍等)、EDTA、Tris缓冲液、RNase抑制剂;灭活型主要含有Hank’s液基础、抗生素、BSA(V)、HEPES缓冲剂等。这些成分直接接触皮肤立即用清水冲干净,然后用洗手液洗净即可,并不会造成中毒。

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