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生物缓冲剂Tris在核酸凝胶电泳中的应用

2020/06/06 13:30
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三羟甲基氨基甲烷Tris是生物化学领域应用很广泛的一种缓冲剂,cas号77-86-1,具有性质稳定不参与生化过程、缓冲能力强等优点,被广泛用于蛋白质和核酸相关的检验。

由于Tris的用量很大很广泛,一些细节也需要注意,Tris缓冲液虽然缓冲能力强,但稀释过大或者反应体系体积变化大的时候,需要慎重使用Tris,稀释十倍的话篇pH变化大于0.1,磷酸盐缓冲液则pH变化小于0.1。

Tris通常被用于核酸DNA或RNA的琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液,通常用的缓冲体系有TAE、TBE、TPE等,即生物缓冲剂Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的缓冲溶液。不同公司使用的缓冲液有所差异,相对来说使用磷酸的TPE较少,主要是使用TAE和TBE缓冲液。

在做核酸琼脂糖凝胶电泳时,首先的准备工作就是制备凝胶,琼脂糖凝胶做的好坏直接影响电泳效果和效率。这个制作过程耗时较长,节约时间考虑也可以直接购买制备好的预制凝胶。

TAE琼脂糖核酸电泳凝胶

电泳液制备好后,就可以放到电泳槽中,开始点样,然后开电源开始电泳,使用TAE/TBE使,一般需要20-30分钟完成电泳,电压建议不超过200V,TAE相对来说比TBE电泳液电压可以高一些。电压越高,电泳速率越快,不过相应的分辨率也会低一些。

TBE的电导率大于TAE的电导率。因此相比于TAE,TBE不太会导致电泳槽内过热的情况发生,长时间电泳建议使用TBE。硼酸是酶的抑制剂,因此如果你需要分离电泳的DNA用于酶切反应,建议使用TAE作为电泳缓冲溶液。TAE对于较片段的分离效果更好,TBE适用于小于300bp的片段。TAE更适用于回收DNA片段。

Tris跟bicine一样是德晟侧重研发生产的一款生物缓冲剂,此外,对与之关联的EDTA、病毒保存液、病毒运输介质、核酸提取液也有丰富的生产经验,欢迎广大合作伙伴咨询探讨。

 

 

 

 

 

 

 

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Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种常见的生物缓冲液,可用于整个DNA提取过程。从多种来源提取过程中,DNA对pH敏感。在细胞裂解,去除不需要的细胞成分和沉淀过程中,可以使用tris来维持稳定的pH值。另外,它在细胞裂解中也起到特别重要的作用。
生物缓冲剂是电泳技术的重要组成部分,一般将其添加到溶液当中,以在电流通过样品时使pH稳定。此外,缓冲剂还能提供电泳迁移时所需的离子。
谷氨酸脱氢酶(简写GDH)是生物体代谢途径中一种重要的酶类。该酶广泛存在于各种高等植物、生物及动物体内,它在生物体内氮、碳代谢过程中起着至关重要的作用

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