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不同浓度HEPES缓冲液的配制

2020/06/13 13:30
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生物缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时保持溶液的pH值相对稳定的溶液,多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在细胞培养过程中,经常少不了HEPES缓冲液,在开放式的培养条件中,若加入HEPES,可防止培养基内pH氧化升高,从而将PH维持在7.0左右。 HEPES分子量为238.31,化学名4-羟乙基哌嗪乙磺酸,分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物缓冲剂,pH值缓冲范围:6.8-8.2,用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。下面我们来看看不同浓度的HEPES缓冲液是怎么配制的

根据用途,一种是单纯的HEPES+NaOH,另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下:

11.0 M/L HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制500ml):称取119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M/L 的NaOH水溶液调节至所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容500ml,于4摄氏度保存。

2、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml):分别称取HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g用0.5M/L NaOH 水溶液调节到合适的pH值,最后定容500ml,得到的生物缓冲液HEPES浓度为55mM/L

32×HEPES缓冲盐溶液的配制100ml):分别称取1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M/L NaOH溶液调节所需pH值,再用蒸馏水定容100ml得到42mM/L的HEPES

4、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH7.2,滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mM/L。

5、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液,最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH7.5一8.0,然后用水定容100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。

HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L,对细胞没有毒性作用。一般情况下,浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。德晟公司销售的HEPES为约10g包装的小瓶,也有20g和50g规格的包装,大家可根据实际使用情况灵活配制。

 

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