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不同浓度HEPES缓冲液的配制
生物缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时保持溶液的pH值相对稳定的溶液，多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。 HEPES分子量为238.31，化学名4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。下面我们来看看不同浓度的HEPES缓冲液是怎么配制的。
根据用途，一种是单纯的HEPES＋NaOH，另一种是HEPES＋盐。各种配制方法总结如下：
1、1.0 M/L HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制（500ml）：称取119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M/L 的NaOH水溶液调节至所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2），然后用蒸馏水定容到500ml，于4摄氏度保存。
2、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）：分别称取HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g，用0.5M/L的 NaOH 水溶液调节到合适的pH值，最后定容到500ml,得到的生物缓冲液HEPES浓度为55mM/L。
3、2×HEPES缓冲盐溶液的配制（100ml）：分别称取1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M/L的 NaOH溶液调节到所需pH值，再用蒸馏水定容到100ml得到42mM/L的HEPES。
4、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH到7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mM/L。
5、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH到7.5一8.0，然后用水定容到100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞没有毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。德晟公司销售的HEPES为约10g包装的小瓶，也有20g和50g规格的包装，大家可根据实际使用情况灵活配制。
