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胍盐类RNA样本保存液在核酸检测中的重要作用

2020/07/04 13:30
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2020年的新冠肺炎可谓是洪水猛兽,不仅吞没了许多人的生命,还打乱了生活节奏。一场疫情中国GDP直线下降,经济直接回到十年前。纵使疫情相对有所控制,但专家不能保证已经完全控制,甚至还会卷土重来。核酸检测是目前确诊、控制新冠肺炎的主要方法,可核酸检测也遇到层出不穷的问题-检测出现大量假阴性,针对这个问题RNA样本保存液提供了很大的帮助。

灭活型RNA样本保存液

普通样本保存液在提取样本核酸前需将样本置于56℃以上以灭活病毒。这一灭活过程无疑是保护临检人员免受病毒暴露所必需,但也会破坏病毒核酸的完整性,导致部分样品不能被正常检出,成为高假阴性率的原因之一。

    高温加热会增加RNA的降解,降低样本检出量,这个是肯定的,使用RNA保存液可以有效的抑制RNA的降解。关于病毒样本的采集后的保存,比如咽拭子取样以后,把样品封装装到采样管里,并不是所有的无菌采样管都能用来保存病毒,至少需要一个RNA样本保存液来保存。保存病毒一般会使用非灭活病毒保存液。

    非灭活病毒保存液成分为:Hanks液基础,庆大霉素,真菌抗生素,BSA (V) ,冷冻保护剂、生物缓冲剂及氨基酸等。多种抗生素联合,具有抗细菌和抗真菌的作用。牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性。Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。它的好处是可以有效的保存病毒的活性。便于后续对病毒分离、培养。但前提是必须低温保存。

RNA是很容易被降解的,RNA酶(RNase)简直就是RNA提取操作的天敌。RNase来源广泛,自然界各种生物(包括人类)都会生产RNase这东西。所以很难保证你采集的样本中不会混入RNase。RNA酶别说56度,室温下都会降解RNA,所以我们保存样本都需要4°(短期)或者-70°(中长期),如果要长期保存RNA病毒得用液氮。很多时候做提取实验都需要复苏后快速裂解样品,甚至在冰上操作才能降低RNA被降解的速度。如果本来样本中采集到的病毒RNA样本少,在被RNase降解一会就更少了,加热到56°后酶的活性提高,92°这个酶都不会变性反而效率会更一步提升,那么降解现象肯定更严重。

有什么办法可以保存病毒的不被RNase分解呢?答案就是胍盐类RNA病毒保存液,也就是病毒灭活保存液。

胍盐一般有盐酸胍、硝酸胍,氰基胍这类的,这东西可以有效的使得蛋白质变性。RNase也是一种蛋白酶也会被变性,失去它本来的作用。而且大家考虑下病毒外壳也是蛋白质构成的,所以胍盐还能给病毒灭活。还省去了56°加热的过程。

病毒灭活保存液可以灭活病毒降低病毒样本的传染性,同时省去高温加热的过程大大提高了核酸检测的准确度。德晟自疫情以来一直努力研发病毒保存液,助力核酸检测。德晟病毒保存液有灭活和非灭活两种,还可提供采集样本的鼻拭子和咽拭子。

 

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