4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液使用说明

4-羟乙基哌嗪乙磺酸，简称HEPES，CAS号7365-45-9，通常是作为生物缓冲剂应用在生化实验中，性质与EPPS相似，通常用于对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作。

理化性质：HEPES

分子式：C8H18N2O4S

分子量：238.31

状态：晶体粉末

pKa:7.45-7.65

缓冲范围：6.8-8.2

结构：

纯度：大于99%

使用浓度：10-50mmol/L

根据使用不同，HEPES缓冲剂受两种常用的缓冲系统：

1. HEPES缓冲液：HEPES＋NaOH （500mL）：119.15g HEPES溶解在400mL蒸馏水中，加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH，需注意有效的pH缓冲范围是6.8-8.2,然后用蒸馏水定容到500mL；

HEPES试剂粉末

2. HEPES缓冲盐溶液:HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4·7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，定容到500mL。

3. 2×HEPES缓冲盐溶液：将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节到所需pH值,再用蒸馏水定容到100ml即可。在细胞-细胞黏附实验中含钙、镁离子；HA细胞培养溶液中不含钙、镁离子，含有BSA。

HEPES缓冲液的优点：

1. HEPES与Bicine不同，它不含配位基团，与多数金属离子不能形成稳定配合物，适用于含有金属离子的溶液体系中的缓冲剂。

2. HEPES水溶性好，缓冲范围接近中性，虽然PIPES也不与多数金属离子形成配合物，但由于PIPES能形成自由基，因此不适合应用于氧化还原体系，而且具有相对较大的离子强度，PIPES偏酸性。

3. HEPES在低浓度时对细胞没有毒副作用，能较长时间控制恒定的pH范围，使用终浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。因此常用在HA溶液、细胞培养液、病毒保存液甚至护肤品中。

生物缓冲剂中与HEPES性质接近的有EPPS和PIPES，它们分别用作不同实验的缓冲剂，有时候也可以互相代替。德晟是生产缓冲剂的厂家，对多种缓冲剂的生产、销售都比较有经验，欢迎合作伙伴参观指导！