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HEPES裂解缓冲液应用于细胞核质蛋白提取CAS7365-45-9

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HEPES裂解缓冲液应用于细胞核质蛋白提取CAS7365-45-9

2020/07/17 13:30
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HEPES 即4-羟乙基嗪乙磺酸(N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ),一种白色晶体粉末,氢离子缓冲剂,可以较长时间控制恒定的pH 范围。有效缓冲范围为pH6.8-8.2。 常用于配制蛋白提取裂解缓冲液、细胞培养用缓冲液等。

HEPES 的解离常数是 7.5HEPES 与其 Na-HEPES 等摩尔混合时,溶液PH是7.5,一般都是先配好固定摩尔浓度的HEPES,然后用强碱(一般常用NaOH)调节pH指定值,这里NaOH只是起到了提供OH的作用,用其他强碱如KOH也可以的,pH差别大时,用浓NaOH微调时,用稀NaOH,若直接加NaOH固体,误差太大,而且NaOH溶解时放热,改变了温度后可能会影响pH电极准确性

 

HEPES裂解缓冲液配制:

裂解液A:

裂解液B:

HEPES

10mmol/L,pH7.9

HEPES

20mmol/L,pH7.9

KCl

10mmol/L

NaCl

420mmol/L

MgCl2

1.5mmol/L

MgCl2

1.5mmol/L

DTT

1mmol/L

DTT

0.5mmol/L

甘油

5%

甘油

25%

EDTA

0.2mmol/L

EDTA

0.2mmol/L

NP-40

1%

 

 

PMSF  (使用前加入)

1mmol/L

PMSF (使用前加入)

0.5mmol/L

aprotinin

3mg/L

aprotinin

5mg/L

leupeptin

3mg/L

leupeptin

5mg/L

pepstainA

2mg/L

pepstainA

3mg/L

 

操作步骤
1.将细胞收集到EP管中,离心(4000r/min,5min,4度)。
2.用PBS洗三次,离心同上,弃上清。
3.加入100微升缓冲液A,冰上孵育10min,离心(14000r/min,1min),弃上清。
4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中,混匀,冰上30min,离心(14000r/min,15min,0度),收集上清,弃沉淀。

其中,裂解液A的作用主要用于释放胞浆蛋白和膜蛋白,裂解液B用于释放核蛋白,NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂,它的作用是既可破坏细胞膜(较温和),又可结合释出的蛋白防止沉淀,所以通过步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。核蛋白提取后可用裂解液A透析2h,合并用于IP;或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验

德晟公司的体外诊断试剂原料主要有:1、生物缓冲剂Tris、BICINE、HEPES、CAPS、MOPS、TAPS、EPPS、MOPSO、PIPES、PEP;2、化学发光试剂鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯DMAE-NHS、吖啶酯NSP-DMAE-NHS、吖啶盐NSP-SA、吖啶盐NSP-SA-NHS、吖啶酰肼NSP-SA-ADH、吖啶酯ME-DMAE-NHS;3、新型Trinders试剂TOOS、TOPS、ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS;4、采血管添加剂抗辐照分离胶、肝素钠、肝素锂、EDTA-2K3K、EDTA-2NA、促凝剂、促凝粉等,此外还生产病毒保存液和卡波姆940/980,欢迎各位朋友前来选购。

 

 

 

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