病毒保存液灭活效果验证实验
发布时间：
2020-07-18
病毒采样管内添加的病毒保存液有两种类型，一种是改良型裂解病毒蛋白提取核酸的灭活型保存液，一种是以运送培养基为基础改良的维持病毒体外活性、其核酸及抗原完整性的非灭活型保存液。对于灭活型保存液，高效灭活病毒，防止二次感染是很重要的。
与非灭活型不同的是，灭活型病毒保存液添加有高浓度的裂解盐可高效灭活病毒，能有效防止操作员二次感染，但是又含有Rnase抑制剂，能保护病毒核酸不被降解，从而使后续能通过NT-PCR进行检测，以下对其灭活效果进行实验验证。
一、灭活验证材料
1 SPF鸡胚（并自行孵化至10日龄）
2 鸡传染性支气管炎病毒 IBV QXL87株种毒
3 生理盐水（0.9% NaCl），经高压灭菌
4 灭活型样本保存液，3个批次。
5 RNA提取试剂盒
病毒保存液灭活病毒
二、实验方法
1.将制备好的鸡传染性支气管炎病毒 QXL87株种毒添加到保存液中，按1（病毒原液）：10（保存液） 比例，置室温18-26℃ 45min。将病毒液接种SPF鸡胚，收获尿囊液。
2.将1中收获的尿囊液按尿囊腔接种方式接种10日龄SPF鸡胚，每个样品接种10枚鸡胚，0.1 mL/枚，置于37℃培养箱中培养144 h，弃去24 h死亡的鸡胚，观察记录24-144 h鸡胚死亡情况和接种后有病变的活胚数的数量。观察鸡胚病变，同时对收获的尿囊液进行鸡传染性支气管炎病毒核酸检测，参照GB/T 23197-2008 鸡传染性支气管炎诊断技术，使用RNA提取试剂盒提取RNA，并使用一步法Real-Time RT-qPCR进行病毒检测。
组1/2/3加入病毒（100ul）+保存液（900ul）；组4加入病毒（100ul）+生理盐水（900ul）；组5/6/7加入保存液（1000ul）。其中病毒保存液依次为3个批次的。
三、实验结果
根据以上实验结果，组1、2、3接种加入病毒的保存液后，显示鸡胚生长正常；组4接种加入病毒的生理盐水，鸡胚病变；组5、6、7只接种保存液，显示对鸡胚生长无抑制。说明灭活型保存液能够灭活病毒。
通过本次实验可以说明，德晟灭活型保存液随机抽样的三个批次都可以使病毒高效灭活，而且对细胞的正常生理功能没有抑制作用，因此此款灭活型病毒保存液可以达到高效灭活各种病毒，提取核酸，适用于 RT-qPCR核酸检测实验。当然鉴于更加快速的检测，是直接用于新冠确诊病患的检测，在国内很少有企业会这样做，因为毕竟新冠病毒并不那么容易获得！
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