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病毒保存液灭活效果验证实验

2020/07/18 13:30
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病毒采样管内添加的病毒保存液有两种类型,一种是改良型裂解病毒蛋白提取核酸的灭活型保存液,一种是以运送培养基为基础改良的维持病毒体外活性、其核酸及抗原完整性的非灭活型保存液。对于灭活型保存液,高效灭活病毒,防止二次感染是很重要的。

与非灭活型不同的是,灭活型病毒保存液添加有高浓度的裂解盐可高效灭活病毒,能有效防止操作员二次感染,但是又含有Rnase抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,从而使后续能通过NT-PCR进行检测,以下对其灭活效果进行实验验证。

一、灭活验证材料

1 SPF鸡胚(并自行孵化至10日龄)

2 鸡传染性支气管炎病毒 IBV QXL87株种毒

3 生理盐水(0.9% NaCl),经高压灭菌

4 灭活型样本保存液3个批次。

5 RNA提取试剂盒

病毒保存液灭活病毒

二、实验方法

1.将制备好的鸡传染性支气管炎病毒 QXL87株种毒添加到保存液中,按1(病毒原液):10保存液) 比例,置室温18-26 45min。将病毒液接种SPF鸡胚,收获尿囊液。

2.1中收获的尿囊液按尿囊腔接种方式接种10日龄SPF鸡胚,每个样品接种10枚鸡胚,0.1 mL/枚,置于37℃培养箱中培养144 h,弃去24 h死亡的鸡胚,观察记录24-144 h鸡胚死亡情况和接种后有病变的活胚数的数量。观察鸡胚病变,同时对收获的尿囊液进行鸡传染性支气管炎病毒核酸检测,参照GB/T 23197-2008 鸡传染性支气管炎诊断技术,使用RNA提取试剂盒提取RNA,并使用一步法Real-Time RT-qPCR进行病毒检测。

1/2/3加入病毒(100ul)+保存液(900ul);组4加入病毒(100ul)+生理盐水(900ul);组5/6/7加入保存液(1000ul)。其中病毒保存液依次为3个批次的。

三、实验结果

根据以上实验结果,组123接种加入病毒的保存液后,显示鸡胚生长正常;组4接种加入病毒的生理盐水,鸡胚病变;组567只接种保存液,显示对鸡胚生长无抑制。说明灭活型保存液能够灭活病毒。

通过本次实验可以说明,德晟灭活型保存液随机抽样的三个批次都可以使病毒高效灭活,而且对细胞的正常生理功能没有抑制作用,因此此款灭活型病毒保存液可以达到高效灭活各种病毒,提取核酸,适用于 RT-qPCR核酸检测实验。当然鉴于更加快速的检测,是直接用于新冠确诊病患的检测,在国内很少有企业会这样做,因为毕竟新冠病毒并不那么容易获得!

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