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琼脂糖预制凝胶电泳的原理及优势

2020/07/20 13:30
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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖预制胶套装

琼脂糖凝胶电泳原理:

    琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳主要区别是:它兼有"分子筛"和"电泳"的双重作用。

琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中。

蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为合适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。

DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

琼脂糖预制凝胶电泳优点:

1.琼脂糖凝胶是具有大量微小孔道的基质,其孔径尺寸取决于它的浓度。0.075琼脂糖的孔径为800nm,0.16的孔径为500nm , 1%的琼脂糖孔径为150nm ,这都是常用的琼脂糖凝胶的浓度,可以分离0.1-60kb左右的DNA,大孔性有利于兔疫固定、免疫电泳和微量制备

2.琼脂糖具有较高机械强度,允许在1%或更低的浓度下使用;且与别的生物只存在微弱的结合

3.琼脂糖无毒,琼脂糖胶凝固过程不会发生自由基聚合,无需催化剂

4.琼脂糖胶具有热可逆性,低熔点易于回收样品,可用于对温度敏感材料的制备

5.易于保存,是高灵敏放射自显影的理想材料

琼脂糖预制凝胶本质上和普通的琼脂糖凝胶没什么区别,只不过是提前大批量把凝胶做好,并提前进行核酸染料预染,省去在进行核酸电泳时大量制胶时间和购买及使用核酸染料的步骤,一般情况下需要自己配备琼脂糖、核酸染料、电泳液和loading buffer等试剂,准备工作繁琐且耗时耗钱,而琼脂糖预制胶电泳试剂盒一个试剂盒全部解决。本试剂盒可以给您节省一个小时左右的实验时间。

电泳一般需要经历制备电泳液、点样、电泳、清洗电泳槽4个步骤,整个过程耗时耗力。琼脂糖预制胶电泳试剂盒配有高压快速电泳液15mL,提高电泳效率的同时节约了时间和采购成本。

 

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