琼脂糖凝胶电泳三种Tris缓冲液选择和操作注意事项

发布时间:

2020-07-23


琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过这种网状时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力则更大,在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,还取决于分子大小,这样会提高DNA条带的分辨。琼脂糖凝胶电泳缓冲液中有几种适用于天然双链DNA的电泳。电泳缓冲液的选择对电泳结果有一定的影响,电泳时使用新制的缓冲液可以很大提高电泳效果,常用的三种电泳缓冲液均Tris盐溶液:TAE(Tris-乙酸盐)、TBE(Tris-磷酸盐)、TBE*(Tris-硼酸盐)。

Tris粉末

三种琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制:

此三种电泳缓冲液适合用于电泳,但也有一些区别:

1、TAE的缓冲容量低,长时间电泳会被消耗。此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化,凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色呈蓝紫色到黄色的变化,要定期更换缓冲液。

2、TBE浓储存液长时间存放后容易形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液,出现沉淀后就要丢弃处理。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE,是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量

3、TAE缓冲液,一般用2~3次就要更换,TBE缓冲液则可使用10次左右。

4、碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液应现用现配在配制琼脂糖凝胶电泳缓冲液时,种都需要加适量的EDTA,以除去2价金属离子。硼酸与琼脂糖易形成复合物,使琼脂糖凝胶带负电荷,这样会导致吸附带正电荷的物质。

5、TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。此浓度的贮存液pH为8.3左右,在应用前需要稀释,并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液

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