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Tris与Tris-HCl和Tris-EDTA之间的三角恋

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Tris与Tris-HCl和Tris-EDTA之间的三角恋

2020/07/30 13:30
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Tris: 三羟甲基氨基甲烷

三羟甲基氨基甲烷(Tris)是一种有机化合物,其分子式为(HOCH 2) 3CNH 2。Tris被用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。在生物化学实验中用的TAE和TBE缓冲液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris。它含有氨基的情况下可以与醛发生缩合反应。缓冲特性Tris为弱碱,在室温(25℃下,它的pKa为8.1;根据缓冲理论Tris 缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。

Tris 碱的水溶液pH在1 0.5左右,一般加入盐酸以调节 pH 值所需值,即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。

由于Tris缓冲液为弱碱性溶液,DNA在这样的溶液中会被去质子化,从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA 制成“TE 缓冲液”,TE 缓冲液被用于DNA 的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸,则获得“TAE缓冲液”(Tris/Acetate/EDTA),而换成硼酸则获得“TBE 缓冲液”(Tris/Borate/EDTA)。这两种生物缓冲液用于核酸电泳实验中。

 

 

1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度1M Tris-HCl

配制量1L

配制方法:

1 .称量121 .1g Tris置于lL烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。

pH值  HCl

7.4约 70ml

7.6约 60ml

8.0约 42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后,室温保存。

注意: 应使溶液冷却室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

组份浓度1.5M Tris-HCl

配制量1L

配制方法

1.称量181 .7g Tris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.用浓HCl调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后,室温保存。

注意: 应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,

温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

Tris-HCl 缓冲液的优点是:

①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;

②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

其缺点是:

①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0. 1;

②温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,即:△pKa/℃=-0. 031,例如:4℃时缓冲液的pH=8. 4,则37℃时的pH=7. 4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的 Tris-HCl 缓冲液不能用于0℃~4℃。

③易吸收空气中的 CO2, 所以配制的缓冲液要盖严密封。

④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳, 保存时注意密封,如果要求无菌,可以加叠氮钠

TE 即 Tris-EDTA buffer (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7.4 pH7.6 pH8.0)。

常用分子生物学试剂,用于DNA的溶解等。

配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度:100mM Tris-HCl,10mM EDTA

配制量:1L

配制方法:

1.量取下列溶液,置于lL烧杯中。

1M Tris-HCl Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0) 100 ml

500 mM EDTA(pH8.0)20ml

2.向烧杯中加入约800ml 的去离子水,均匀混合。

3.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。

4.室温保存。

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