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生物缓冲剂HEPES在细胞培养中的优势

2020/08/06 17:05
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 HEPES是生物化工中重要的生化制剂, 在生物学研究领域中被认为是重要的缓冲剂之一HEPES N - 羟乙基哌嗪- 1- 乙磺酸,性状为白色结晶粉末, 是一种弱酸,常作为有机化工中的两性离子缓冲剂和医药中间体。因其有以下的优点常被选做细胞培养的缓冲剂:

缓冲剂系列产品包装

1、HEPES的分解能力可随温度的升高而增强,随温度的降低而减弱,但与其他生物缓冲剂相比,它的分解常数随温度变化不大,这使HEPES缓冲液成为在低温时可较好地保持酶的结构和功能的缓冲剂该缓冲剂能较长时间控制恒定的pH范围,对细胞无毒性作用。

2、大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4,HEPES在此范围内具有较好的缓冲能力,但适合的pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。多数培养液依靠的是碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。这种情况下细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。但是,储存一定时间后缓冲体系会随着CO2的挥发PH随之增高,此时细胞传代消化进行吹打时培养液很快变紫,使得使用这种培养液培养的细胞不易成活,即使成活,活性也很低,增殖速度很缓慢。而在培养液中加入HEPES,则可以避免这种问题的发生,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。HEPES缓冲液的使用终浓度一般为10---25mM。

HEPES使用方法:

1、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH到7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L.

2、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液,然后应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH到7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存.

德晟生化提示,当用作细胞培养的缓冲剂时,培养液中的HEPES在可见光下暴露3h以上将产生对细胞有毒性的过氧化氢,建议培养液避光保存。

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