生物缓冲剂HEPES在细胞培养中的优势

 HEPES是生物化工中重要的生化制剂, 在生物学研究领域中被认为是重要的缓冲剂之一，HEPES N - 羟乙基哌嗪- 1- 乙磺酸，性状为白色结晶粉末, 是一种弱酸，常作为有机化工中的两性离子缓冲剂和医药中间体。因其有以下的优点常被选做细胞培养的缓冲剂：

缓冲剂系列产品包装

1、HEPES的分解能力可随温度的升高而增强，随温度的降低而减弱，但与其他生物缓冲剂相比，它的分解常数随温度变化不大，这使得HEPES缓冲液成为在低温时可较好地保持酶的结构和功能的缓冲剂，该缓冲剂能较长时间控制恒定的pH范围，对细胞无毒性作用。

2、大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4，HEPES在此范围内具有较好的缓冲能力，但适合的pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7)， 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。多数培养液依靠的是碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲，气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。这种情况下细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。但是，储存一定时间后缓冲体系会随着CO₂的挥发PH随之增高，此时细胞传代消化进行吹打时培养液很快变紫，使得使用这种培养液培养的细胞不易成活，即使成活，活性也很低，增殖速度很缓慢。而在培养液中加入HEPES，则可以避免这种问题的发生,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。HEPES缓冲液的使用终浓度一般为10---25mM。

HEPES使用方法：

1、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH到7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L.

2、亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，然后应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH到7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.

德晟生化提示，当用作细胞培养的缓冲剂时，培养液中的HEPES在可见光下暴露3h以上将产生对细胞有毒性的过氧化氢，建议培养液避光保存。