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做生化检测,怎能不了解新型Trinder’s试剂DAOS

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做生化检测,怎能不了解新型Trinder’s试剂DAOS

2020/07/03 17:05
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标签:DAOS,新型Trinder’s试剂

DAOS,新型Trinder’s试剂的一种,中文全称N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐,常用于尿酸及肾功能检测的检测试剂盒,具有水溶性好、灵敏度高、稳定性强等优点。是一种白色或浅蓝色粉末,CAS号是82692-97-5,此产品对光感和湿度比较敏感。

DAOS氧化反应

 

特点:作为新型Trinder’s 试剂的一员,DAOS与其它显色底物相比,拥有高水溶性 ,是一种稳定的苯胺类似物 ,生色过程和氧化反应的pH范围很广 ,被广泛用于诊断检测和生化试验。在比色法测定过氧化氢活性中比常规生色的试剂具有若干优势。新型Trinder’s 试剂足够稳定,既可以用于溶液也可以用于试验流水线检测系统中。

DAOS检测溶液的制备:

1. 用 10 ml PBS缓冲液溶解 23mg DAOS以制备6.6 mM DAOS 溶液。(具体溶度根据需要调节)

2. 用 10 ml PBS缓冲液溶解 14mg 4-氨基安替比林(4-AA)以制备 6.6 mM 4-AA 溶液。

3. 用 PBS 制备 2 U/ml 辣根过氧化物酶溶液。

4. 将等体积的各溶液混合以制备检测溶液。4℃下避光储存检测溶液。

检测步骤:

1. 为酶促氧化反应制备样品溶液。缓冲液的 pH 值范围应为 5.5-9.5。

2. 使用相同缓冲液制备含有已知量的底物的标准溶液。

3. 向样品溶液中加入合适单位的氧化酶,接着加入等体积的检测溶液。

4. 室温或 37℃下孵育该混合物 30 分钟到 1 小时。

5. 测定 593 nm 处的 O.D.值。

6. 制备标准曲线,并测定样品溶液中的底物浓度。

检测原理:在过氧化氢和过氧化物酶的存在下,新型 Trinder’s 试剂在与 4-氨基安替比林(4-AA)或 3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH)的氧化偶合反应过程中,形成非常稳定的紫色或蓝色染料。与MBTH偶合染料的摩尔吸光度比与4-AA偶合染料的高 1.5-2 倍。底物被其氧化酶酶促氧化产生过氧化氢,该过氧化氢的浓度对应于底物浓度,可通过氧化偶合反应的显色测定底物的量。

注意事项:

1、分装:在取用少量mg级DAOS时,需将产品分装成每次需要用的数量,减少开瓶次数,避免产品吸潮。

2、使用:使用产品时需要提前半个小时将产品从冰柜拿出放置至室温,使用完毕若有剩余,将剩余DAOS用密封避光的容器盛放,避免产品出现颜色或者性质变化等质量问题。

3、保存:将DAOS放置在0-5度的冰柜里,并记录清楚取用时间及批号。

4、运输:将分装好的产品用泡沫盒子里面放上冰 将产品用泡沫胶包好,注意避免冰块的水将产品打湿(温度高我们就多放两个,冬天可随天气温度来决定)

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