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蛋白标记技术到底有多神秘

2020/08/12 17:05
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众所周知,随着体外诊断试剂免疫检测技术不断更新换代,放免、酶免、流式、化学发光、POCT及分子诊断等技术层出不穷,。对于检验人来说,技术是多样的,但原理却是相通的,就比如蛋白标记技术在试剂研发中必不可少,但是如果不是专业人士,恐怕很难讲清楚蛋白标记究竟是怎么回事,蛋白标记究竟有多神秘,我们今天来揭开蛋白标记的“神秘面纱。

今天,本文将讲解一下不同类型的蛋白标记技术。标记工艺在免疫检测中屡见不鲜,根据材料性质可以简单分为两大类,一类是固相-蛋白标记,一类为生物大分子与蛋白标记。

常见的固相材质如NC膜、PVDF膜、乳胶微球、磁性微球、时间分辨微球、量子点等,其中NC膜和PVDF膜主要见于免疫印迹法相关产品或者使用与核酸杂交,其原理为物理吸附,主要包括疏水作用及静电力作用来结合在固相材质上。

蛋白标记的化学过程

常见的标记包括生物素、荧光物质等标记抗体、抗原或其它蛋白,或者将蛋白标记于微球上。对于绝大多数酶、抗原或抗体都是蛋白质范畴,因此,酶标抗体本质上仍属于蛋白与蛋白之间的偶联,其标记原理通常是利用蛋白的α氨基、ε氨基、亚氨基及巯基等亲核性质。

对于微球-蛋白标记而言,主要原理为用不同官能团如—NH2、—CooH、—CHO及—SH等进行微球修饰,然后再通过活化剂如EDC、NHS/EDC或者DTT等活化微球上基团,进而与蛋白上的相应基团进行交联。

酶标抗体一般都是采用戊二醛法或者过碘酸钠法进行偶联,但容易出现酶、酶-抗体以及抗体-抗体混合物,为克服此弊端可使用如SPDP进行偶联可减少自身聚合物出现。

蛋白质标记的主要目的是监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。目前有多种类型的标记物和标记方式可供选择,大家应该针对特定的应用选择适合的标记策略及技术。

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