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做好生化实验,选对缓冲剂很重要

2020/08/16 17:05
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生物缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时保持溶液的pH值相对稳定的溶液,多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,需要有缓冲体系来中和在代谢过程中出现的pH变化。在生化研究工作中,常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度,不同的实验对缓冲液的要求也是不同的。我们通常用到的生物缓冲液有以下几种:

一、 Tris缓冲液:

Tris缓冲液一种弱碱,通常在“中性”范围内使用,常加入HCl得到TRIS-HCl缓冲液。Tris-HCl缓冲范围pH=7.5 -8.5;三磷酸缓冲液缓冲范围pH = 5.0- 9.0。

优点:碱性较强,可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

生物缓冲剂 

生物缓冲剂缺点:

1、缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;

2、温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大一定要在使用温度下进行配制,。

3、易吸收空气中的CO2,配制的缓冲液要盖严密封。

4、此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用。

二.Good’s缓冲液

在 1960 年代中期,N.E.Good鉴于一般的缓冲液系统并不适合生化实验所使用,必须用人为设计和人工合成的方法来找到专门用于生命科学研究的特定的缓冲体系,这些Goods缓冲体系都具有以下特质:

1、 pKa值在6-8之间;

2、 在水中的溶解度高;

3、不易穿透生物膜;

4、盐效应小;

5、离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小;

6、不与金属离子生成复合物或沉淀;

7、该缓冲剂化学稳定;

8、紫外和可见光波长范围内光吸收小;

9、易制得高纯度的盐

优点不参加和不干扰生物化学反应过程,对酶化学反应等无抑制作用,所以它们专门用于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作。

缺点:价格昂贵,对测定蛋白质含量的双缩脲法和Lowry法不适用,因为它们会使空白管的颜色加深。

三、 磷酸盐缓冲液:

磷酸盐是生物化学研究中使用非常广泛的一种缓冲剂,由於它们是二解离,有二个pKa值,所以用它们配制的缓冲液,pH范围最宽:NaH2PO4: pKa1=2.12, pKa2=7.21 Na2HPO4: pKa1=7.21, pKa2=12.32

优点:易于配制成各种浓度 ;pH值范围宽;pH受温度的影响小;

缺点:易与常见的钙、镁、重金属离子形成沉淀;抑制某些生化过程;

四、甘氨酸缓冲液

甘氨酸缓冲液pH值范围广,应用范围广。pH值范围为2.0-11.0。

优点:为细胞成分和各种提取物提供更亲近的自然环境。

缺点:类似于磷酸盐缓冲体系;干扰某些生化反应过程,例如代谢过程。

除以上四种类型的生物缓冲液还有硼酸盐缓冲液、有机酸缓冲液、氨基酸缓冲液等,都有各自的优缺点,在此不一一赘述,湖北新德晟材料科技有限公司可提供各种高纯度高稳定性的生物缓冲剂,包括TRIS、TRIS-HCl、BICINE、CAPS、MOPS、TAPS等,此外还可提供各种采血管添加剂、化学发光试剂、显色底物等,欢迎各位致电垂询!

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