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四大化学发光底物性能的比较

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四大化学发光底物性能的比较

2020/08/20 17:05
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化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象。最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射(发光)。

鲁米诺最早使用的发光底物,与辣根过氧化物酶连用发光。不添加增强剂,其发光体系为闪光型且信号弱。优点在于:底物合成难度低,且目前应用最广泛。

AMPPD的优点,在碱性环境下,AMPPD的非酶解性的水解程度低,即本底低; AMPPD的热稳定性好,在pH=7.0的水中,30℃时的分解半衰期为142h,活化能为21.5kcal/mole;AMPPD的酶解发光为辉光型,波长为470nm,在15min时强度达到高峰,15-60min内光信号强度维持一致,变化很小,即使在12h后仍能测定得出正确结 果;加入增强剂如聚氯苄乙烯苄基二甲基铵(BDMQ)或BSA等,能明显增强AP酶解AMPPD的 发光强度,增强因素达100-100000倍。整体性能强于鲁米诺。

吖啶酯的优缺点

优点:化学发光不需要催化剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光,具有许多优越性,特别是无须一个催化过程,也不需要增强剂,从而降低了背景发光,提高了信噪比,干扰作用少。该类化合物作为化学发光免疫分析的发光标记物,还具有其它方面的优点,如光释放快速集中,发光效率高,发光强度大,易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少,标记物稳定,在2-8℃下可保存数月之久,因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一类非常有效的化学发光标记物。

缺点:产生不稳定、间断、闪烁性的发光;其检测方式需要采用原位进样和时间积分法测量,即在检测器部位加装进样器,并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行。

三联吡啶钌的优缺点

优点: 快速的检测时间,可控的反应条件,宽广的检测范围,高精密度高灵敏度,低标本检测用量。

缺点:仪器采用的流动比色池,交叉污染为潜在问题;对环境因素和其它非特异性反应过于敏感;检测仪器贵。

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