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吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)——用于标记核酸的方法

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吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)——用于标记核酸的方法

2020/09/04 13:30
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新型冠状病毒的检测方法除了核酸检测(RT-PCR)法还有抗体检测,核酸检测是直接对采集标本中的病毒核酸进行检测,特异性强,敏感度相对较高,是当前确诊新冠肺炎主要的检测手段。抗体检测是对人体血液中的抗体水平进行检测包括胶体金法和磁微粒化学发光法,用于对核酸检测阴性的病例进行辅助诊断,也可以对病例的进行排查筛查。其中化学发光法用于新冠病毒抗体检测具有重要的临床价值。

左:病毒保存液 右:吖啶酯

吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)外观为黄色粉末,CAS号194357-64-7,是一种重要的化学发光试剂。吖啶酯具有反应条件温和、重现性好、发光效率高、发光强度强等优点,广泛应用于无机有机化合物、环境监测、生物及药物分析等领域,另外也普遍用于多种类型疾病的灵敏检测和诊断。

在体外诊断方面,吖啶酯化合物很适合于标记DNA链以制造化学发光DNA探针,下面将详细介绍一种吖啶酯标记核酸的方法。

核酸是所有生物分子中最重要的物质,广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类。现代医学研究成果表明,许多疾病如癌症和遗传疾病的发生都与DNA的突变有关,且许多传染性疾病是由环境中的病毒、病菌或寄生虫引起的,因此对病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。

在核酸杂交分析中,制备特异性强、灵敏度高的标记探针是核酸杂交分析成功的关键,吖啶酯衍生物可以直接标记在核酸探针上,不需催化剂且发光量子产率不受影响;另外,在一定条件下,未杂交的单链DNA上标记的吖啶酯被水解破坏,只有杂交形成的双链保护的吖啶酯才能产生化学发光,不需分离即可监测整个杂交过程。

这种吖啶酯标记核酸的方法,主要包括3个步骤,首先分别对DNA探针5’端、3’端进行保护;然后进行吖啶酯标记,最后HPLC纯化分离DNA。其中吖啶酯标记最为关键,将25mM 吖啶酯溶解于二甲基亚砜(DMSO)中,配置1M HEPES缓冲液(PH=8.0),按照摩尔比核酸探针:吖啶酯以1:5的条件,加入到HEPES缓冲液中,37℃温度下反应1小时。

这种方法创造性的在DNA两端都标记了吖啶酯,进一步提升了检测的灵敏度。

德晟可提供多种新冠检测原料,核酸检测核心原料病毒保存液、TRIS以及HEPES,抗体检测原料吖啶酯,还可提供配套材料鼻、咽拭子和一次性病毒采样管,新冠面前,德晟与你一起风雨前行。

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