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核酸的提取及裂解离不开病毒保存液

2020/09/04 17:05
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作为一切分子生物学研究的基础,核酸的提取永远是开展一项研究的第一步,提取核酸的质量高低是下游分子生物学实验成败的关键。下文将会详细介绍关于DNA提取的相关信息,包括DNA提取的原理、核酸提取纯化原则和要求等。

首先介绍下DNA提取的基本原理

DNA的提取可以简单的分为裂解和纯化两大步骤,裂解是破坏样品细胞结构,从而使样品中的DNA游离在裂解体系中的过程,纯化则是使DNA与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

裂解过程当然离不开裂解液,常规的裂解液都含有去污剂 (如SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20等) 和盐 (如Tris、EDTA、NaCl等)。这些去污剂的作用是使蛋白质变性;破坏膜结构;去除与核酸相互作用的蛋白质。裂解液中还会加入一些生物缓冲剂,可以提供合适的裂解环境,如Tris;裂解体系中还可能加入蛋白酶,利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段,促进DNA与蛋白质的分离,同时,也便于后续的纯化操作。

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。

下面介绍一下核酸提取的纯化原则和要求

1、保证核酸一级结构的完整性

2、排除其它分子的污染(如提取DNA时排除RNA的干扰)

3、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子

4、尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质

   以上介绍的就是核酸的裂解及提取过程中需要关注的一些问题,不管是裂解还是提取核酸,都离不开一个最重要的东西,那就是病毒保存液,德晟生产研发的灭活病毒保存液是具有裂解功能的样本保存液,样本保存及裂解一步完成,不需要另外再加入裂解液,避免了病毒样本的进一步稀释,可以在病毒核酸提取过程中增加样本投入量,提高后续检测灵敏度。

 

 

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