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带你领略不同的化学发光试剂

2020/09/19 13:30
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将免疫反应和化学发光反应相结合,藉以检测抗原或抗体的技术。它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上,免疫反应结束后,加入氧化剂或酶底物而发光,通过测量发射光强度,根据标准曲线测定待测物的浓度。CLIA的主要优点是灵敏度高、标记物有效期长、检测范围宽,可实现全自动化等

酶促反应的发光底物:鲁米诺,AMPPD等

直接化学发光试剂:吖啶酯以及衍生物

电化学发光剂:三联吡啶钌

酶促反应的发光底物:

是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底物)发光,这一类需要酶催化后发光的发光剂称为酶促反应发光剂。

鲁米诺的发光原理:

鲁米诺在碱性条件下,过氧化氢(氧化剂)以及酶的存在下,生成一种具有发光性能的电子激发态的中间体3-氨基邻苯二甲酸。由激发态转化为基态的过程中,以光子的形式释放出的能量,波长位于可见光的蓝色部分。

鲁米诺-辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析:

该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原(或抗体),在与反应体系中的待测物标本与固相载体发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-酶(HRP)标记抗体的复合物,这是加入鲁米诺发光剂,过氧化氢和发光增强剂是产生化学发光。

AMPPD的发光原理:

AMPP在碱性条件下,被AP(碱性磷酸酶)酶解生产相当稳定的AMP-D阴离子,其有2~30min的分解半衰期,发出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度达到高峰,15~60min内光的强度保持相对稳定。

AMPPD-碱性磷酸酶(AP)标记的化学发光免疫分析:

该分析系统以碱性磷酸酶标记抗原(或抗体),在与反应体系中的待测物标本与固相载体发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-酶(AP)标记抗体的复合物,这时加入AMPPD发光剂,碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。

直接化学发光底物

该底物在发光免疫分析过程中不需要酶的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。

吖啶酯:

在碱性条件小被过氧化氢氧化时,发出波长为470nm的光,具有很高的发光效率,其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。

吖啶酯标记的化学发光免疫分析:

吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体的复合物,这时只需加入氧化剂(过氧化氢)和氢氧化钠使成碱性环境,吖啶酯在不要催化剂的情况下分解,发光。

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