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吖啶酯在DNA测定中的应用

2020/09/22 17:05
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吖啶酯衍生物是一类量子产率较高的化学发光试剂,由于它发光过程所需的引发剂少、背景和噪音低、灵敏度高,常用于临床免疫测定。作核酸分子探针,测定生物酶的活性或其它应用,可以标记抗体广泛应用于免疫测定;这类化合物只要在过氧化氢存在下就迅速产生化学发光,具有很高的化学发光效率。又由于吖啶酯具有与乙酰苯酯相似的结构,具有单一酯键,检测的灵敏度高,因此可用于酶活性的检测。

吖啶酯作为一种高效的化学发光试剂,在临床免疫分析,DNA 分析,生物酶活性测定等方面有着广泛的应用。本文重点介绍吖啶酯在DNA 测定中的应用。吖啶酯在DNA方面可用于基因测定或微生物测定。

吖啶酯在DNA测定中的应用:

吖啶酯可以标记寡核苷酸片段探针应用于基因测定或微生物测定。吖啶酯化合物很适合于标记 DNA 链以制造化学发光 DNA 探针。现代医学研究成果表明,许多疾病如癌症和遗传疾病的发生都与 DNA 的突变有关,且许多传染性疾病是由环境中的病毒、病菌或寄生虫引起的,对病毒特定序列 DNA 的分析有利于疫情的控制。对DNA 序列以及其链中碱基突变的检测在基因筛选、遗传疾病早期诊断和治疗、病原基因测定方面具有十分深远的意义。

在核酸杂交分析中,制备特异性强、灵敏度高的标记探针是核酸杂交分析成功的关键,吖啶酯衍生物可以直接标记在核酸探针上,不需催化剂且发光量子产率不受影响;另外,在一定条件下,未杂交的单链DNA上标记的吖啶酯被水解破坏,只有杂交形成的双链保护的吖啶酯才能产生化学发光,不需分离即可监测整个杂交过程。

根据这一原理,有研究人员建立了杂交保护检测醛脱氢酶和阿尔茨海默病相关基因ApoE的基因微阵列新方法。该方法设计了两根生物素标记的 DNA 探针来检测醛脱氢酶的A/G位点多态性,三根生物素标记的DNA探针被用于检测ApoE两个位点的C/T多态性,在突变位点标记吖啶酯,然后将此DNA探针固定在链霉亲合素包被的微孔板上,只有当目标DNA和探针DNA完全匹配情况下,才能保证吖啶酯不被水解,根据化学发光的有无即可测定醛脱氢酶和ApoE基因。王晓娟等以吖啶酯为嵌入DNA双螺旋结构的化学发光指示剂,以0.1mol/LHNO3和3%H2O2以及0.3mol/LNaOH 加 2%TritonX-100 为发光启动试剂,建立了一种简单的评价DNA断裂损伤的化学发光分析新方法。

结果表明,低浓度的甲醛引起的DNA断裂损伤,高浓度的甲醛引起 DNA 链的交联,乙醛仅引起DNA链的断裂损伤。同时研究了甲醛和乙醛对 DNA 的损伤行为及其可能的机制。吖啶酯作为DNA探针还被应用于HBV和HIVI型和II型DNA的测定,HIV-ⅠDNA 寡核苷酸探针测定gag基因以及用于免疫分析,DNA 寡核苷酸探针测定ΔF508、ΔI507 囊性纤维化基因突变等。

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